テーラーメイド治療への応用をめざすヒトiPS細胞の標準化培養器材の開発

开发人类 iPS 细胞标准化培养设备，旨在将其应用于定制治疗

• 批准号: 23240067
• 负责人: 赤池 敏宏
• 金额: $ 13.31万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23240067/
• 关键词: iPS細胞; E-カドヘリン; 再生医療; 組織工学; ES細胞

ヒトiPS細胞を用いた再生医療の実現には,iPS細胞の安全性や様々な組織への分化制御も重要であるが,ヒトからの迅速なiPS細胞の樹立も課題の一つである.現在の樹立法では遺伝子導入後,ディッシュ上のiPS細胞の出現を観察して樹立している.このため,一つのディッシュのどこにどのくらい出現するかはわからないのが現状である.そこで,E-cad-Fcを利用したiPS細胞の効率的な樹立を実現する.線維芽細胞からiPS細胞を樹立する場合,線維芽細胞集団の中にiPS細胞が出現するようになる.線維芽細胞集団は,通常E-カドヘリンを発現していないがiPS化した線維芽細胞はE-カドヘリンを発現するようになる.そこで,遺伝子導入を行った線維芽細胞をE-カドヘリン-Fc上に培養して,E-カドヘリンを発現するiPS細胞のみをいち早く効率的に採取し,フィーダーフリーの培養系に移して増殖させていく.これによって迅速且つ効率的なiPS細胞の樹立を成功させる.本年度では,ヒトiPS細胞の迅速な樹立法を検討するための条件検討として,マウスiPS細胞の樹立の迅速法について検討を行った.マウス繊維芽細胞にpiggyBAC法を用いて,Oct3/4,sox7,klf4,c-Mycの遺伝子導入を行い,マウス繊維芽細胞のiPS化に成功した.そして,マウスiPS細胞のE-カドヘリン-Fcコート培養皿に対する接着を検討した.その結果,新たに作製したマウスiPS細胞は未分化性を維持しており,E-カドヘリン-Fcコート培養皿に対する接着性が高いことが見出された.

在使用人IPS细胞实现再生医学时，IPS细胞的安全性和将分化为各种组织的控制也很重要，但是从人类中快速建立IPS细胞也是一个挑战。在当前的立法中，基因转移后，观察到IPS细胞在盘子上的出现。因此，目前尚不清楚其中有多少盘中出现在一道菜中。因此，使用E-CAD-FC有效地建立IPS细胞。从成纤维细胞中建立IPS细胞时，IPS细胞出现在成纤维细胞群中。在成纤维细胞群体中，它们通常不会表达E-钙粘蛋白，但是IPS形成的成纤维细胞会表达E-钙粘着蛋白。因此，转基因成纤维细胞在e-钙粘蛋白-FC上培养。只能快速有效地收集表达E-钙粘着蛋白的IPS细胞，转移到无馈物培养系统中并生长。这允许快速有效地建立IPS细胞。在今年，我们研究了建立小鼠IPS细胞的快速方法，以此作为检查人IPS细胞快速建立的条件。我们使用PiggyBac方法将OCT3/4，SOX7，KLF4和C-MYC基因转移到小鼠成纤维细胞中，并成功地将小鼠成纤维细胞转化为IPS。然后，我们研究了小鼠IPS细胞对E-钙粘蛋白FC涂层培养皿的粘附。结果，发现新生产的小鼠IPS细胞仍未分化，并且对含电子蛋白-FC涂层的培养皿具有很高的粘附。