薬用ニンジンサポニンの生合成の研究

药用胡萝卜皂苷的生物合成研究

• 批准号: 07672258
• 负责人: 海老塚 豊
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672258/
• 关键词: 薬用ニンジン; サポニン; 毛状根; ダンマレンジオール; オキシドスクワレン; シクロアルテノール; 閉環酵素

(1)マロニル体を含むジンセノサイド関連サポニンの逆相系HPCLによる分析条件を確立した。また、薬用ニンジン由来オキシドスクワレン閉環酵素の予想される閉環産物である、シクアルテノール、ダンンマレンジオール、β-アリミンを分離するHPLC条件、および真正サポニンのアグリコンであるプロトパナキサジオール、プロトパナキサトリオールの分析条件も同時に確立することができた。(2)オタネニンジン毛状根液体培養系を誘導し、生長およびサポニン生産を(1)の条件で経済的に測定し、サポニン生産が通常の二次代謝産物生産とは異なりほぼ生長と平行して上昇していることを見出した。(3)液体培養約30日目の毛状根より調整した蛋白中にオキシドスクワレン閉環酵素活性を検索し、シクロアルテノール、β-アミリンへの閉環活性のほか、ダンンマレンジオールへの閉環活性を見出だした。これらの活性はいづれも超遠心により沈殿するミクロソーム画分に局在することが判明した。ダンンマレンジオールへの閉環については、生成物に非放射性の標品を加え再結晶する稀釈分析により20Rの配置をもつダンンマレンジオール-IIであることを確証した。なお、この活性は他の植物閉環酵素とは異なり、界面活性剤により著しい不活化を受け、可溶化には成功していない。(4)毛状根の脂溶性画分を(1)の条件で検索し、微量のプロトパナキサジオールを検出したが、ダンンマレンジオールおよびプロトパナキサトリオールは検出されず、アグリコン生成以降の配糖化は高発現していることを確認した。

(1)建立了用反相HPCL分析含有丙二酰衍生物的人参皂苷相关皂苷的条件。此外，还研究了分离药用胡萝卜中氧化角鲨烯闭环酶的预测闭环产物氰喹烯醇、丹纳马二醇和 β-丙胺以及正宗皂苷苷元原人参二醇、原帕那基的 HPLC 条件。同时还建立了Satriol的分析条件。 (2)诱导人参毛状根液体培养系统，并在(1)的条件下经济地测量生长和皂苷产量。与正常的次生代谢产物生产不同，我发现皂苷产量几乎与生长平行。正在上升。 (3)我们在液体培养约30天后从毛状根制备的蛋白质中寻找氧化角鲨烯闭环酶活性，发现对环木菠萝烯醇和β-香树脂醇的闭环活性，以及​​对丹马烯二醇的闭环活性。我发现了。发现所有这些活性都集中在超速离心沉淀的微粒体级分中。对于丹马烯二醇的闭环，我们通过在产物中添加非放射性标准品并重结晶进行稀释分析，确认其为具有20R构型的丹马烯二醇-II。请注意，与其他植物闭环酶不同，这种活性会被表面活性剂显着失活，并且溶解并不成功。 (4)在(1)的条件下检索毛状根的脂溶性级分，检测到微量的原人参二醇，但未检测到丹马二醇和原人参三醇，确认了糖基化高表达。

项目成果

K,Inoue: "Conversion of fnoostand glycoside to spirostanol glycoside by B-glucosidese." Phytochemistry. 41. 725-727 (1996)

K,Inoue：“通过 B-葡萄糖苷将 fnoostand 糖苷转化为螺甾烷醇糖苷。”

K,-S,Ko: "Production of polyketide pinments in hairy root aultures of Cassia plants." Chem,Pharm,Bull.43. 274-278 (1995)

K，-S，Ko：“在决明子植物的毛状根中生产聚酮化合物针剂。”

M・Kusano: "Molecular cloning of CDNA encoding rat 2,3-oxidosqinalene:Ianesterd cyclrse." Bicl.Pharm.Bull. 18. 195-197 (1995)

M. Kusano：“编码大鼠 2,3-氧化喹啉：Ianesterd cyclrse 的 CDNA 的分子克隆。Bicl.Pharm.Bull。”18. 195-197 (1995)

C,-K,Sung: "Molecular cloning of CDNA encoding human lanosterol synthase" Bicl.Pharm.Bull. 18. 1459-1461 (1995)

C,-K,Sung：“编码人羊毛甾醇合酶的 cDNA 的分子克隆”Bicl.Pharm.Bull。