先天異常形質出現についての動物モデルを用いた分子遺伝学的研究

使用动物模型对先天性异常现象进行分子遗传学研究

基本信息

批准号：
04670302
负责人：
遠藤晃
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670302/
关键词：
XOマウス Zfx Rps4 遺伝子発現

项目摘要

ヒトのXO個体であるターナー症候群とXOマウスではその表現型に大きな違いが見られる。この違いは、X染色体上の遺伝子の発現様式の違いに起因する可能性がある。本研究は、ヒトTurner症候群と関連が深いと考えられている遺伝子、ZFXおよびRPS4XのマウスホモローグZfxおよびRps4について、XOマウス及びXXマウス間でノーザンブロット法を用いてmRNA量の比較をおこない、転写レベルでの発現様式を知ることを目的としたものである。当教室で樹立、維持しているXOマウスコロニー(Jcl:ICR由来)のXXマウス肝臓より、oligo-d(T)セルロースを用いmRNAを精製した。このmRNAを用い、RT-PCR法によりZfxおよびRps4の遺伝子断片を増幅し、これをpUC118に組み込んで組み換えDNAを作成し、大腸菌DH5αを用いてクローニングを行った。クローニングした遺伝子断片については塩基配列を決定して目的遺伝子断片であることを確認した。この遺伝子断片をrandom priming法により^<32>Pでラベルしてノーザンブロッティングのプローブとした。現在、ノーザンブロッティングによるmRNAの定量を行っている最中であり、未だ最終的な結果を得る段階にはきていない。XOおよびXXマウスの肝臓、腎臓および脾臓から、AGPC法によりtotal RNAを精製した。これらのRNAをホルムアルデヒド変性化で電気泳動後、ナイロンメンブレンに転写した。このメンブレンに対し上記のプローブを用いてハイブリダイゼーションを行い、オートラジオグラフィーによりシグナルの検出を行っている。シグナルの定量はX線フィルムの像をスキャナーで取り込み、MacintoshIIおよびNIH Imageを用い画像解析により行っており、厳密な比較ができると考えられる。

人XO个体特纳综合征和XO小鼠之间的表型存在显着差异。这种差异可能是由于X染色体上基因表达方式的差异所致。这项研究旨在将MRNA水平与ZFX和RPS4X的小鼠同源物ZFX和RPS4进行比较，这些ZFX和RPS4被认为与人类特纳综合征密切相关，使用XO和XX小鼠之间的Northern印迹，以在转录水平上学习表达模式。从使用Oligo-D（T）纤维素中建立并维持在我们的教室中建立并维持的XO小鼠菌落的XX小鼠肝脏纯化mRNA。使用此mRNA，通过RT-PCR扩增ZFX和RPS4基因片段，并通过将它们掺入PUC118中，并使用大肠杆菌DH5α克隆来制备重组DNA。克隆基因片段的核苷酸序列被确定以确认它是靶基因片段。该基因片段使用随机启动方法用 ^<32> p标记，以形成探针以供北印迹。目前，我们目前正在通过Northern印迹对mRNA进行定量，但尚未达到我们可以获得最终结果的阶段。通过AGPC方法从XO和XX小鼠的肝脏，肾脏和脾脏中纯化总RNA。通过甲醛变性将这些RNA电泳，然后转移到尼龙膜上。使用上述探针杂交该膜，并通过放射自显影检测信号。通过使用扫描仪和使用Macintosh II和NIH图像进行X射线膜的图像来量化信号，并认为可以进行严格的比较。