歯周疾患と栄養の関係(分子疫学的アプローチ)

牙周病与营养的关系（分子流行病学方法）

基本信息

批准号：
14657542
负责人：
小澤雄樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

サイトカイン関連遺伝子検査とHLA遺伝子検査1.TaqMan PCR法の遺伝子多型分析への導入歯肉溝滲出液中のサイトカイン(TNF-α、IL-1)を測定するためフィールドで歯肉溝滲出液を採取することは設備や運搬が困難であることが判明。その代わり、フィールドでの採取と運搬が容易な頬粘膜剥離細胞を用い、そのDNA上のサイトカインに関連する遺伝子多型のタイピングを試みた。まず初めに、IL-1β領域の一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphism : SNP)解析をTaqMan PCR法で行った。TaqMan PCR法とは、IL-1β領域の多型部位にハイブリダイズするような2種類の蛍光色素でラベルされたTaqManプローブを用いてPCRを行う。TaqManプローブ上の2種類の蛍光色素は、物理的距離が近いため蛍光強度が低下した状態におかれているが、対立遺伝子特異的PCRプライマーと鋳型DNAが一致した場合はPCRが進行し、TaqManプローブが分解され、色素が遊離し蛍光を発する。この蛍光強度を測定することで、PCR産物を定量するという方法である。2.サイトカインの遺伝子検査被験者24名のIL-1β領域をTaqMan PCR法でSNP解析したところ、全ての被験者で反応が確認された。このことから、前年に頬粘膜剥離細胞から得られたDNA抽出物のDNA量で、TaqMan法を用いた遺伝子検査が行えることが明らかになった。IL-1β領域のSNP解析結果は、ホモが13名、ヘテロが11名であった。他のサイトカイン関連遺伝子の分析を、現在TaqMan PCR法によって行っているところである。3.HLA遺伝子検査DNAのHLA遺伝子検査は、DQB1とDRB1についてのみ、現在行っているところである。

细胞因子相关基因检测及HLA基因检测 1、引入TaqMan PCR方法进行基因多态性分析现场采集龈沟液，测定龈沟液中细胞因子（TNF-α、IL-1）原来设备及运输很困难。相反，我们使用易于在现场收集和运输的颊粘膜脱落细胞，并尝试对其DNA上与细胞因子相关的遗传多态性进行分型。首先，使用TaqMan PCR方法对IL-1β区域进行单核苷酸多态性(SNP)分析。 TaqMan PCR 方法使用标记有两种荧光染料的 TaqMan 探针进行 PCR，这些荧光染料与 IL-1β 区域的多态性位点杂交。 TaqMan 探针上的两种荧光染料由于物理距离较近而处于荧光强度减弱的状态，但如果等位基因特异性 PCR 引物和模板 DNA 匹配，PCR 就会进行，TaqMan 探针会被分解染料被释放，发出荧光。该方法涉及通过测量荧光强度来量化 PCR 产物。 2.细胞因子基因检测当使用TaqMan PCR对24名受试者的IL-1β区域进行SNP分析时，在所有受试者中均确认了反应。由此可知，可以利用从前一年的颊粘膜脱落细胞中提取的DNA提取物中的DNA量，进行利用TaqMan法的基因检测。 IL-1β区域的SNP分析结果显示，13个为纯合子，11个为杂合子。我们目前正在使用 TaqMan PCR 方法分析其他细胞因子相关基因。 3. HLA基因检测 DNA HLA基因检测目前仅针对DQB1和DRB1进行。