革新的なHLA遺伝子異常解析に基づく造血幹細胞移植後再発の機序解明への挑戦

基于创新HLA基因异常分析阐明造血干细胞移植后复发机制的挑战

基本信息

批准号：
22K16332
负责人：
吉川枝里
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16332/
关键词：
HLA 移植 AML MDS NGS 発現解析血液腫瘍移植後再発

项目摘要

[研究背景]本研究の目的は、がん根治を目指すために、移植後再発に関わる免疫逃避の要因の一つであるHLA発現低下の機序を明らかにすることである。具体的には、造血幹細胞移植後に再発が認められた症例を対象に、HLA発現変化の特徴付けやその変化をもたらす遺伝子異常要因の同定を行い、その結果をもとに、HLA発現低下に伴う再発の機序解明を目指す。[研究実績]移植後に再発したAMLまたはMDS患者7例の初診時と移植後再発時の凍結骨髄細胞から、腫瘍細胞と正常細胞をソーティングにより分離した。分離した腫瘍細胞分画について、メイギムザ染色の塗抹標本を作製し100%が腫瘍細胞であることを確認した。得られた細胞から抽出したRNAに対し、次世代シークエンサーを用いてHLA遺伝子12座の発現解析を行った。その結果、7例中6例で移植後にHLA遺伝子の発現低下が認められ、特にクラスII遺伝子群の発現低下が著しく、全症例においてDQ遺伝子の低下が認められた。発現低下の特徴は個々に異なり、片側アレルの発現欠失やDQ遺伝子の完全な発現欠落などが見られた。次に、移植前後で発現量に差があった症例について、次世代シークエンサーを用いてRNAおよびDNAの塩基配列を決定し、配列異常の有無を確認した。その結果、一部の症例でHLA遺伝子のDNA配列上にLOH （loss of heterozygosity）や終止コドン置換を確認し、発現低下の主要因がDNA配列の異常であることが示唆された。以上から、移植後に再増殖した腫瘍細胞におけるHLA発現の特徴として特にHLA-DQ遺伝子の発現が低下する傾向にあることが示唆された。一部の症例ではDNA配列異常が発現低下の要因であることが明らかになったが、その他の症例における発現低下の要因についてはまだ不明である。

[研究背景]本研究的目的是阐明降低HLA表达的机制，HLA表达是导致免疫逃生的因素之一，涉及移植后复发，以旨在旨在癌症治疗。具体而言，我们旨在表征HLA表达的变化并确定基因异常因素，这些因素在造血干细胞移植后复发而导致HLA表达的变化，并且基于结果，我们旨在阐明与HLA表达降低相关的复发机制。 [研究结果]在最初的咨询中从冷冻的骨髓细胞中分类肿瘤细胞和正常细胞，并在移植后7例AML或MDS患者在移植后复发后复发。对于分离的肿瘤细胞分数，用Magiemsa染色制备涂片，并确认100％的肿瘤细胞是肿瘤细胞。使用下一代序列仪从从获得的细胞中提取的RNA上进行了12 HLA基因基因座的表达分析。结果，七个病例中有6例显示移植后HLA基因的表达降低，并且II类基因组的表达尤其明显降低，并且在所有情况下均降低了DQ基因。降低表达的特征从一个到另一个方面有所不同，包括缺失单侧等位基因的表达以及完全缺乏DQ基因的表达。接下来，对于植入前后表达水平差异的情况，使用下一代序列器确定RNA和DNA核苷酸序列以确认是否存在序列异常。结果，在某些情况下，在HLA基因的DNA序列上证实了杂合性（LOH）和停止密码子取代的丧失，这表明表达降低的主要原因是DNA序列中的异常。从以上提出，尤其是HLA-DQ基因的表达倾向于降低植入后肿瘤细胞中HLA表达的特征。尽管已经揭示了DNA序列异常是导致表达下降的因素，但在其他情况下导致表达下降的因素仍然未知。