血管内皮細胞のアポトーシス誘導による抗血管新生療法の開発

通过诱导血管内皮细胞凋亡来开发抗血管生成疗法

基本信息

批准号：
14656115
负责人：
奥田潔
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度はウシ黄体細胞由来血管内皮細胞においてFas mRNA発現が認められ、腫瘍壊死因子(TNFα)およびインターフェロン(IFN)-γがFasを介レたアポトーシス誘導機構に関与していることを明らかにした。本年度は、(1)成長因子のFasを介したアポトーシスにおよぼす影響、(2)アポトーシス誘導機構または抑制機構のメカニズム(bcl-2ファミリーのmRNA発現)、(3)血管内皮細胞にFas遺伝子導入を行うことによるアポトーシス誘導モデルの作出について検討した。1.TNFα、IFNγおよびFasリガンドの添加に加え、成長因子(VEGF,IGE,bFGE,EGF)を単独または組み合わせて添加し、血管内皮細胞の細胞死およびアポトーシスの指標となるアポトーシス小体ならびにDNAの断片化についてそれぞれ検討した。その結果、VEGF単独または、VEGFと他の成長因子の組み合わせ添加において、TNFα、IFNγおよびFasリガンドの誘導するアポトーシスが抑制された。さらに、これらの添加区においてアポトーシス小体ならびにDNAの断片化が減少した。2.1.の各添加区において、bcl-2およびbax mRNA発現について検討した。その結果、アポトーシスの抑制が認められたVEGF単独または、VEGFと他の成長因子を組み合わせた添加区において、baxに対するbcl-2発現の割合が高くなった。3.血管内皮細胞にFas遺伝子導入をしたアポトーシス誘導モデルマウスの作出を試みたが、生存能力が極めて低く、目的としている部位にFasリガンドを注入する実験には至らなかった。以上の結果から、ウシ黄体の血管内皮細胞において、VEGFなどの成長因子はFasを介したアポトーシスに対する抑制作用をもち、その作用はbaxに対するbcl-2発現を高めることによることが示唆された。今後は、アポトーシス誘導モデルマウスを改良し、生体におけるアポトーシス誘導機構の詳細について検討していく予定である。

去年，在牛黄体细胞来源的血管内皮细胞中观察到Fas mRNA表达，发现肿瘤坏死因子（TNFα）和干扰素（IFN）-γ参与Fas介导的细胞凋亡诱导机制。今年，我们将重点关注（1）生长因子对Fas介导的细胞凋亡的影响，（2）诱导或抑制细胞凋亡的机制（bcl-2家族mRNA表达），以及（3）Fas基因导入血管内皮细胞我们研究了使用这种方法创建细胞凋亡诱导模型。 1.除了添加TNFα、IFNγ、Fas配体外，还单独或联合添加生长因子（VEGF、IGE、bFGE、EGF），诱导细胞凋亡小体和DNA，这是细胞死亡和凋亡的指标。检查每个血管内皮细胞的碎片。结果，单独添加 VEGF 或 VEGF 与其他生长因子的组合可抑制 TNFα、IFNγ 和 Fas 配体诱导的细胞凋亡。此外，在这些添加的组中，凋亡小体和 DNA 片段减少了。 2.1检测各添加组Bcl-2、bax mRNA表达量。结果，在单独添加VEGF或与VEGF和其他生长因子联合添加的组中，bcl-2表达与bax的比例较高，从而抑制了细胞凋亡。 3.我们尝试通过将Fas基因导入血管内皮细胞来制作凋亡诱导模型小鼠，但存活能力极低，无法进行将Fas配体注射到靶位点的实验。这些结果表明，VEGF等生长因子对牛黄体血管内皮细胞中Fas介导的细胞凋亡具有抑制作用，并且这种作用是由于bax上bcl-2表达增加所致。未来，我们计划完善小鼠凋亡诱导模型，并研究体内凋亡诱导机制的细节。