ウシ顆粒層細胞の分化に伴うPGF2αレセプター発現調節機構の解明

阐明牛颗粒细胞分化过程中PGF2α受体表达的调控机制

基本信息

批准号：
08660345
负责人：
奥田潔
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660345/
关键词：
ウシ卵胞顆粒層細胞黄体化 PGF2αレセプター細胞培養 mRNA 黄体細胞

项目摘要

排卵直前の卵胞を構成する顆粒層細胞においてPGF2αが合成分泌されることが明らかとなり、PGF2αが卵巣内局所調節因子として作用することが示唆されている。しかし、その生理作用は多くの研究が行われているにもかかわらず、ほとんど解明されていない。PGF2αは細胞膜上の特異的なレセプターを介して作用することから、レセプターの発現とその調節機構の解明はPGF2αの生理的役割を明らかにする上で重要な意義があると考えられる。そこで、本研究ではウシ顆粒層細胞のPGF2αレセプター発現について遺伝子レベルでの検討を試みた。1,ウシ成熟卵胞あるいは小卵胞より採取した顆粒層細胞のPGF2αレセプターmRNA(PGFRmRNA)発現量について検討した。すなわち、採取した細胞を10%ウシ胎児血清を含むDMEM/F-12で培養した(37.5C,5%CO2in air)後、Guanidine thiocyanate法に従って総RNAを抽出してNorthen blotを行い、PGFRmRNAの検出を行った。その結果、熟成細胞より採取された顆粒層細胞においては、PGFRmRNAが検出されたが、小卵胞に由来する顆粒層細胞では認められなかった。2,小卵胞に由来する顆粒層細胞の分化あるいは黄体化過程におけるPGF2αレセプター調節機構を検討しうる実験系の確立を目的として、培養期間の延長に伴う培養顆粒層細胞のステロイド合成能の変化、形態的変化を検討した。その結果、顆粒層細胞を10%子牛血清を含むDMEM/F-12でInsulinとForskolin存在下において、216時間培養することにより機能的にも形態的にも大型黄体細胞に類似した細胞に分化することが明らかになった。本研究の成果は、日本繁殖生物学会の機関誌であるJournal of Reproduction and Developmentに掲載された。以上の結果から、顆粒層細胞の分化に伴いそのPGFRmRNA発現が誘起されることが明らかにとなった。また、PGFRmRNA発現調節機構の解明に有用な顆粒層細胞の黄体化を誘起しうる培養系が確立された。

研究表明，PGF2α 在排卵前由构成卵泡的颗粒细胞合成并分泌，这表明 PGF2α 作为卵巢内的局部调节因子。然而，尽管对其生理效应进行了大量研究，但仍然很大程度上未知。由于PGF2α通过细胞膜上的特异性受体发挥作用，阐明该受体的表达及其调控机制被认为对于阐明PGF2α的生理作用具有重要意义。因此，在本研究中，我们试图在基因水平上检测牛颗粒细胞中PGF2α受体的表达。 1.我们研究了从牛成熟卵泡或小卵泡收集的颗粒细胞中PGF2α受体mRNA（PGFRmRNA）的表达水平。即，将收集的细胞在含有10％胎牛血清的DMEM/F-12(37.5℃，5％CO2空气中)中培养后，按照硫氰酸胍法提取总RNA，进行Northen blot检测PGFR mRNA 。我做到了。结果，在从成熟细胞收集的颗粒细胞中检测到PGFRmRNA，但在源自小卵泡的颗粒细胞中未检测到PGFRmRNA。 2. 为了建立一个能够研究小卵泡颗粒细胞分化或黄素化过程中PGF2α受体调控机制的实验体系，我们研究了培养时间延长的颗粒细胞的类固醇合成能力的变化；检查了变化。结果，通过在含有10%小牛血清的DMEM/F-12中，在胰岛素和毛喉素存在下培养颗粒细胞216小时，它们分化成功能和形态上与大黄体细胞相似的细胞。会。这项研究的结果发表在日本生殖生物学会会刊《生殖与发育杂志》上。上述结果表明，随着颗粒细胞的分化，PGFR mRNA的表达被诱导。此外，还建立了能够诱导颗粒细胞黄素化的培养系统，这对于阐明PGFR mRNA表达的调节机制是有用的。