アルツハイマー病細胞におけるアミロイドβ蛋白前駆体のプロセッシングに関する研究

阿尔茨海默病细胞中β淀粉样蛋白前体的加工研究

基本信息

批准号：
05670808
负责人：
武田雅俊
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670808/
关键词：
アルツハイマー病血小板 APP KPIドメイントロンビン α顆粒

项目摘要

アルツハイマー病患者および健常者から血小板分画を調整し、トロンビン刺激によるアミロイドβ蛋白前駆体(APP)及びその部分分解産物の血小板からの放出について検討した。APPの同定と定量はウエスタンブッロト法により検討した。血小板のα顆粒放出の指標として血小板第4因子(PF4)を用いた。血小板をトロンビン刺激した後の上清中に約130KDaおよび100KDaのバンドを認め、それらは各々KPIドメインを持った全長型APPとKPIドメインを持った分泌型APPであった。また血小板のα顆粒中にKPIドメインを持った全長型APPが含まれており、分泌型APPはそれとは異なった何らかの機構により血小板から放出されている可能性が示唆された。これらの点でアルツハイマー病患者と健常者の間に特に差異は認められなかった。また全長型APPが血小板から顆粒放出により分泌された後そのままincubateしておくと再び血小板内に再取り込みされていると考えられるデータを得た。この際取り込みは分泌型APPでは認められなかった。これまでに線維芽細胞を用いたProtease Nexin(PN)に関する実験ではPNが線維芽細胞から放出された後proteaseとセルピンドメインで結合し、線維芽細胞中に再取り込みされ、proteaseと共に分解されることが報告されている。近年そのPNファミリーの1つであるPN2がAPPのKPIドメインを持ったものの分泌型であることがわかった。本実験の結果からKPIドメインにproteaseなどの物質がなにも結合していない全長型のAPPが放出された後、しばらくincubateするだけで再び血小板内に取り込まれる可能性が示唆された。このデータは全長型APPからβ蛋白の形成が全小板内に再取り込みされたAPPの分解により起こる可能性を示唆している。

从阿尔茨海默氏病和健康个体的患者中制备了血小板级分，并研究了淀粉样蛋白刺激的淀粉样蛋白β蛋白前体（APP）的释放，并研究了其从血小板中的部分降解产物。通过Western Broto方法研究了APP的识别和量化。血小板因子4（PF4）用作血小板α颗粒释放的指标。血小板刺激后，在上清液中发现了约130 kDa和100 kDa的频带，它们是具有KPI域和具有KPI域的分泌应用的全长应用。此外，血小板的α颗粒中包含具有KPI结构域的全长应用程序，这表明可以通过某些不同的机制从血小板中释放分泌应用程序。在这些方面，没有发现阿尔茨海默氏病和健康个体的患者之间的特殊差异。此外，还获得了数据，即通过颗粒释放从血小板中分泌全长应用，然后按原样孵化，并获得了被认为已被重新爆发到血小板中的数据。在这种情况下，在分泌应用中未观察到摄取。先前使用成纤维细胞进行蛋白酶蛋白酶（PN）的实验，已经报道PN从成纤维细胞释放，然后由Serpin结构域与蛋白酶结合，重新爆发成成纤维细胞，并与蛋白酶一起降解。近年来，已经发现它的PN家族之一PN2具有APP的KPI领域，但是一种分泌形式。该实验的结果表明，在释放不结合KPI结构域的全长应用程序后，可以通过简单地孵育一段时间将它们重新合并为血小板。该数据表明，由于已重新爆发到所有血小板的应用程序降解，可能会发生全长应用程序中β蛋白的形成。