マウス胚由来未分化細胞での染色体欠失の誘導による有効変な異マウス作成法の開

开发一种通过诱导小鼠胚胎未分化细胞中染色体缺失来创建突变小鼠的有效方法

基本信息

批准号：
04454579
负责人：
野田哲生
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1994
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究で我々が試みて来た変異マウス作成法は、まずマウス胚由来未分化細胞(ES細胞)の染色体の特定の遺伝子に相同遺伝子組み換えを利用してマーカー遺伝子を挿入し、これを利用して、その遺伝子の下流の染色体に比較的小さな欠失(200-500kb)を起こさせるというものであった。実際には、染色体上で数100kb離れた領域から別々の染色体DNAを得て、この2つマーカー遺伝子をはさむような形の相同組み換え用ベクターを作成する。もしこのベクターが相同遺伝子組み換えを起こせば、この2つの染色体DNAの間は欠失となるというものである。しかし、平成5年度までの試みから、2つの相同遺伝子領域間の距離が10kbを超すと相同遺伝子組換え率は著しい低下を示すことが明らかとなった。このため、本年度からはこの低い率の組み換え体を効率良く選択出来るよう、一旦TK遺伝子を染色体の標的領域に組み込んだES細胞を作成し、これを用いて2度目の相同組換えによる欠失導入を試みて来た。こうして得られた数多くのFIAU耐性ES細胞の解析を行ったが、このいずれも未だTK遺伝子が染色体に存在し、欠失は導入されていながった。またTK遺伝子を導入したES細胞からマウスを作成することに成功したが、このマウスでは決してホモ接合体を得ることが出来ず、in vivoにおける変異原処理の実験に応用することは出来なかった。現在は、P1ファージのCre組換え酵素を用いた系による欠失導入を目指している。

在这项研究中，我们在这项研究中尝试过的突变小鼠的方法首先将标记基因插入了使用金属基因修饰并使用它的小鼠胚胎don子（ES细胞）的特定基因是导致相对较小的缺失（200-500KB），以使基因下游染色体。实际上，从染色体上的几个100 kbs的面积获得了多种染色体DNA，以及一种突出两个标记基因的同源重组载体的形式。如果矢量引起相基因的修饰，则这两个染色体之间将丢失。但是，从尝试到1993年，很明显，两个相基因区域的百分比超过10 kb。因此，从这个会计年度开始，已经将TK基因纳入染色体的目标区域，以便有效地选择了这种低率的重组体。因此，我们分析了许多耐FIAU的ES细胞，所有这些细胞仍在染色体中，并且没有引入损失。他成功地从引入了TK基因的ES细胞中创建了小鼠，但是该小鼠永远无法获得HOMO托梁，并且不能应用于体内突变治疗实验。目前，我们的目标是使用P1噬菌体重组酶引入缺失。