ミエリン形成障害ミュ-タントにおけるオリゴデンドロサイト変性脱落の機構の解明

阐明髓鞘形成受损突变体少突胶质细胞变性和脱落的机制

基本信息

批准号：
01480155
负责人：
御子柴克彦
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝性にミエリン形成障害を示すジンピ-マウスにおいてはミエリンの主要構成蛋白質であるプロテオリピド蛋白(PLP)の遺伝子内に点突然変異が見い出されており、ミエリン形成細胞であるオリゴデンドロサイト(ODC)が変性脱落する。本研究において、遺伝子導入を通してその治療を試みた。まず、ジンピ-変異を同定する遺伝子診断法を開発した。すなわち、ジンピ-変異の両側をはさむようにオリゴヌクレオチドを合成し、その領域をPolymerase Chain Reaction(PCR)法により増幅した。ポリアクリルアミド電気泳動後メンブランにトランスファ-し、オリゴヌクレオチドプロ-ブで検出することにより、野生型とジンピ-型の識別ができるようになった。次に、PLPの発現ベクタ-を用いてトランスジェニックマウスを作製した。マウスPLP遺伝子のプロモ-タ-領域とポリA付加部位を持ち、間にラットPLP cDNAを含んだPLPミニジ-ンを構築し、マウス受精卵前核に注入した。生まれて来た24匹のトランスジェニックマウスを解析したが外来性のPLPミニジ-ン由来のPLPを発現しているマウスはいなかった。この理由としてPLP発現ベクタ-に発現に必須な領域を充分に含んでいなかったことが考えられるのでPLP全遺伝子をクロ-ニングし、トランスジェニックマウスを作製し直すことを計画した。Lorist Bコスミドベクタ-を用いてマウスジェノミックライブラリ-を作製しPLP cDNAおよびPLP遺伝子の5′、3′末端に対応する合成オリゴヌクレオチドでスクリ-ニングしたところ、5′上流領域20kb、3′下流領域5kbを含んだPLP全遺伝子をクロ-ニングすることに成功した。現在、このものを用いてトランスジェニックマウスを作製中である。この系が確立されれば導入するPLP遺伝子を改変することによりPLP異常とオリゴデンドロサイトの変性脱落との関連が推察できると思われる。

在表明Heredi形成障碍的Jinpi小鼠中，在蛋白辅助蛋白（PLP），蛋白辅助蛋白（PLP）和寡糖蛋白（ODC）的基因中发现了虚拟突变（ODC），一个Mierlin-Mierlin-Formed细胞，，Mierlin-Formed细胞，，，，形成的细胞，，，形成的细胞，，，形成的细胞，，，形成了。被发现。在这项研究中，我们试图通过基因引入来治疗它。首先，我们开发了一种基因诊断方法，可以识别杜松子ain的刺激。也就是说，寡核苷酸是在杜松子化的两侧合成的，并且通过聚合酶链反应（PCR）ACT扩增该区域。 Polyakrille Amido Electry的游泳转移到膜，并用寡核苷酸Pro检测到，已经有可能识别野生和Zinpi-Type。接下来，使用PLP表达矢量创建了转基因小鼠。在小鼠PLP基因和Poly A之间构建了含有大鼠PLP cDNA的PLP迷你jin。他分析了24只转基因小鼠出生，但没有小鼠表达PLP衍生的PLP。可以想象，PLP表达载体不包含PLP表达载体中表达所需的区域，因此我们计划将整个PLP基因变黑并重现转基因小鼠。当小鼠基因组库使用lorist b cosmid载体制备，并用支持PLP cDNA和PLP基因5'，3'端，5'上游面积20kb，3'下游的合成寡核苷酸雕刻包含该区域的5KB的基因。目前，正在使用该小鼠创建转基因小鼠。如果建立了该系统，则可以通过修改引入的PLP基因来推断PLP异常和寡聚位点降解之间的相关性。