新規軟骨分化誘導因子ZSCANCの機能解析

新型软骨分化诱导因子ZSCANC的功能分析

基本信息

批准号：
19659374
负责人：
池田敏之
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659374/
关键词：
転写因子軟骨代謝

项目摘要

SOX6およびII型コラーゲンの転写開始点近傍にZSCANCの応答領域が存在することが明らかとなり、その範囲を50bp以内に絞りこんだ。またII型コラーゲン以外にもアグリカンなどの軟骨基質分子、さらにX型コラーゲン、VEGFAなどの後期分化において重要な役割を果たす分子のプロモーターを活性化することも明らかになった。またSOX6およびII型コラーゲンのプロモーター活性化においてはC/EBP・やGATA5が、X型コラーゲンについてはZIC3が、それぞれZSCANと協調的に作用することも明らかとなり、様々な転写因子と協調することによって多彩な標的分子を転写誘導する可能性が示唆された。既にII型コラーゲン誘導能が明らかになっている共役転写因子C/EBP・やGATA5について、脱分化軟骨細胞にレトロウィルスによる遺伝子導入後アルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、ZSCANCはC/EBP・やGATA5による軟骨細胞の細分化誘導能を増強することが明らかになった。未分化軟骨細胞ATDC5に同様の遺伝子導入を行って検討したところ、軟骨基質誘導能のみならず、肥大分化促進能も有することが明らかとなった。レトロウィルスベクターを用いてZSCANCのsiRNAをATDC5に安定導入し、インスリン刺激で軟骨分化誘導させた後にアルシアンブルーおよびALP染色にて検討をしたところ、基質産生、肥大分化がともに抑制されることも明らかとなった。以上よりZSCANCは様々なパートナー分子と協調的に働いて軟骨分化の各段階を制御することが予測される。ZSCANCのin vivoの機能を検証するため、遺伝子ターゲティングベクターを用いてノックアウトマウスを作成し、解析を行っている。

结果表明，SOX6和II型胶原的转录起始位点附近存在ZSCINC响应区，并且范围缩小到50 bp以内。研究还表明，除了 II 型胶原蛋白外，它还能激活软骨基质分子（如聚集蛋白聚糖）的启动子，以及在晚期分化中发挥重要作用的分子（如 X 型胶原蛋白和 VEGFA）。还揭示了C/EBP和GATA5与ZSCAN协同作用激活SOX6和II型胶原蛋白的启动子，而ZIC3在X型胶原蛋白的情况下与ZSCAN协同作用诱导多种靶标转录的可能性。建议分子。已显示具有II型胶原诱导能力的偶联转录因子C/EBP和GATA5，在逆转录病毒基因导入去分化软骨细胞后使用阿尔新蓝和ALP染色进行检查，结果表明/EBP·和GATA5增强了该能力。诱导软骨细胞的细分。当将类似的基因导入未分化软骨细胞ATDC5时，发现它不仅具有诱导软骨基质的能力，而且具有促进肥大分化的能力。使用逆转录病毒载体将ZSCANC siRNA稳定地导入ATDC5，并通过胰岛素刺激诱导软骨形成分化时，使用阿尔新蓝和ALP染色的检查表明，基质产生和肥大分化均受到抑制。综上所述，预计ZSCINC与各种伙伴分子协同作用，控制软骨分化的各个阶段。为了验证ZScanC的体内功能，我们正在使用基因打靶载体创建基因敲除小鼠并进行分析。

项目成果

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专利数量（0）

C/EBPbeta Promotes transition from proliferation to hypertrophic differentiation of chondrocytes through transactivation of p57.

DOI：
10.1371/journal.pone.0004543
发表时间：
2009
期刊：
PloS one
影响因子：
3.7
作者：
Hirata M;Kugimiya F;Fukai A;Ohba S;Kawamura N;Ogasawara T;Kawasaki Y;Saito T;Yano F;Ikeda T;Nakamura K;Chung UI;Kawaguchi H
通讯作者：
Kawaguchi H

新規軟骨分化転因子ZFPACはC/EBPβと協調的に作用して軟骨分化を誘導する

ZFPAC是一种新型软骨分化因子，与C/EBPβ协同诱导软骨分化。