人の肝細胞を有するマウスを使用した劇症肝炎等の原因となる新規病態微生物の探索

利用具有人类肝细胞的小鼠寻找引起暴发性肝炎的新型病理微生物

基本信息

批准号：
19659186
负责人：
茶山一彰
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659186/
关键词：
肝炎ウイルス劇症肝炎ゲノムキメラマウス

项目摘要

病原微生物を分離する生体材料として、血清を液体窒素中で凍結保存し、ヒト肝細胞キメラマウス接種し、2、7,14,21日と経時的に採血を行った。投与前の血清と投与後の各時点の血清を用いてrepresentational difference analysisにより投与前には存在せず、投与後に存在する核酸を分離同定し、塩基配列を確認することにより未知の病原微生物を検出することを試みている。(1)これまでに液体窒素中に保存されている検体に加え、あらたに劇症肝炎、virus associated hemophagocytic syndromeの症例の血清を保存した。(2)10症例分の検体を一群として、キメラマウスに経時的に投与した。投与前、および投与後1、2,4,8,16週と血清を採取し、保存した。(3)各血清から核酸を抽出し、adopter primerを用いて逆転写反応を行った。さらに、linker ligationを行い、linkerのcomplementary strandとなるprimerを合成、2nd strandの合成を行いdouble strand DNAを得た。投与後の検体から得られたDNAをtester、投与前の血清から得られたDNAを driverとしてrepresentational difference analysisを行い、病原体特異的な核酸を増幅した。現在いくつかのバンドを切り出して、塩基配列の決定を行っている。

作为分离病原微生物的生物材料，将血清冷冻保存在液氮中，接种到人肝细胞嵌合体小鼠中，并在2、7、14和21天时收集血样。使用给药前的血清和给药后各时间点的血清，使用代表性差异分析来分离和鉴定给药后而非给药前存在的核酸，并通过确认碱基序列来检测未知的病原微生物。 (1)除了之前保存在液氮中的标本外，我们还新保存了暴发性肝炎和病毒相关噬血细胞综合征病例的血清。 (2)将来自10个病例的样品作为一组随时间给予嵌合小鼠。在给药前和给药后1、2、4、8和16周收集血清并保存。 (3)从各血清中提取核酸，并使用采用引物进行逆转录反应。此外，进行接头连接，合成充当接头互补链的引物，并合成第二链以获得双链DNA。使用从施用后样品获得的DNA作为测试者和从施用前血清获得的DNA作为驱动器进行代表性差异分析，并扩增病原体特异性核酸。我们目前正在切出几个条带并确定它们的碱基序列。