ヘパラナーゼによる糖鎖プロセシングの可視化と免疫細胞の機能調節における役割の解明

乙酰肝素酶加工聚糖的可视化及其在调节免疫细胞功能中的作用

基本信息

批准号：
19659012
负责人：
東伸昭
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題ではヘパラン硫酸・ヘパリンという硫酸化多糖を対象として、エンド型グリコシダーゼによるこの多糖の限定切断や低分子化を可視化すること、硫酸化多糖と相互作用する分子や細胞の機能が限定切断に伴い調節を受ける機構を解明すること、の2点について、免疫細胞を対象に検討を行ってきた。マスト細胞で生じるヘパリン低分子化は穎粒内物質の生理活性変化を伴う「プロセシング」と考えられることを平成19年度に報告した。 20年度はこれをふまえ、ヘパリン低分子化に伴うマスト細胞の機能変化を広く検討した。顆粒内にヘパリンを蓄積し、かつヘパラナーゼを微弱に発現するマスト細胞株MSTにヘパラナーゼ遺伝子を導入することにより、生体内の結合組織型マスト細胞と同レベルのヘパラナーゼを発現する遺伝子導入株の作製に成功した。この細胞は脱顆粒の閾値、ヒスタミン、ヘキソサミニダーゼの放出量についてモック細胞との間に明確な差を示さなかった。一方、可溶化物が示す高分子基質(フィブロネクチン)の切断活性はペパラナーゼ遺伝子導入株で亢進した。脱顆粒時に放出されるヘパリンを顆粒内蓄積量と考え、これを2つの方法で測定した。代謝標識したヘパリンの放射活性による定量ではヘパラナーゼ遺伝子導入株の方が20%程度高かったが、ウロン酸総量の定量では逆に30%程度少ないという予想外の結果を得た。ヘパラナーゼ遺伝子導入株の顆粒内では生合成されて間もないヘパリンの割合が多い、すなわち顆粒内ヘパリンのターンオーバーが早いものと解釈される。ヘパリン以外の顆粒内生理活性物質について、その細胞内局在と寿命を変化させる可能性がある。

在这项研究中，它针对的是称为肝素硫酸和肝素的高酸性酸性多糖，可视化这种多糖和低分子化，而末端 - 分子和细胞功能与多糖相互作用。阐明伴随着协调机制的机制的两个点的点。据报道，在2007年，在肥大细胞中产生的肝素 - 肝素分子化被认为是与晶粒物质的生理活性变化有关的“加工”。基于此，我们检查了与肝素低少酶相关的肥大细胞的功能变化。通过在颗粒中积累肝素并略微表达肝素的肝素基因MST中，它是产生与联合组织在生物中相同的植物菌株的遗传菌株。在降解颗粒的阈值，组胺和己糖胺酶的释放量上，这些细胞与模拟细胞没有明显的差异。另一方面，溶解剂指示的聚合物底物（纤连蛋白）的切割活性通过辣味酶基因介导的菌株增强。在降解时释放的肝素被认为是在颗粒中积累的，这是通过两种方式进行的。肝素酶遗传学的定量肝素签名肝素的定量量高约20％，但乌洛克酸的总量降低了约30％。在肝酶基因引起的菌株的颗粒中，肝素的比率很快被告知，被解释为颗粒中颗粒的快速营业额。它可能会改变细胞的内部和月经活性物质的寿命以外的其他肝素。