低分子ヘパリンの脊髄損傷に対する治療効果

低分子肝素对脊髓损伤的治疗作用

基本信息

批准号：
22K16654
负责人：
伊藤定之
金额：
$ 3万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16654/
关键词：
spinal cord injury 脊髄損傷低分子ヘパリン

项目摘要

これまで研究代表者らがin vitroで合成オリゴHSによる軸索再生効果示した実験と同様の実験の候補として2種類の低分子ヘパリン(薬剤A、Bとする)を選定した。まず、Surface Plasmon Resonance法（SPR法）を用いて、薬剤A、BとCSとPTPRσとの関連を検討したAとBを比較したところ、AでよりCSとPTPRσの結合を分離する作用が認められた。次に、Isothermal Titration Calorimetry (ITC)で薬剤A、BとPTPRσとの反応性について検討したところ、Aでより高い結合性を認めた。また、研究代表者らが独自に作成したEGFRへのリン酸化をみることでPTPRσの細胞外の状態を判定可能にしたPTPRσの細胞外ドメインにEGFRの細胞内ドメインを結合させたキメラレセプターを用いて、Western Blotting(WB)でリン酸化を判定することで薬剤A、BがPTPRσを多量体にするかを検討したところ、AでよりPTPRσを多量体にすることが明らかとなった。さらに脱リン酸化酵素であるPTPRσはCSで活性化されることがわかっており、HEK293Tを用いてv-srcでリン酸化し、その上でPTPRσを用いて脱リン酸化させたモデルに薬剤A、Bを加えて、PTPRσの脱リン酸化作用に対する効果を検討したところ、AでPTPRσの脱リン酸化作用を抑制していた。次にコンドロイチン硫酸プロテオグリカン（CSPG）をコーティングした培地でマウスのDorsal Root Ganglion（DRG） cultureを行い、薬剤Aと共に培養すると通常であればCSPGを乗り越えて伸長出来ない軸索がCSPGを乗り越えて伸長していた。in vitroでは薬剤Aで合成オリゴHSによる軸索再生効果と同様の効果を認めた。今後はin vivoでの実験を行っていく予定である。

到目前为止，研究代表已经选择了两种类型的低分子肝素（药物A，b）作为与合成寡核HS在体外合成寡核的轴向回收效应相同的实验的候选者。首先，使用表面等离子体共振方法（SPR方法）比较A和B，检查了药物A，B，CS和PTPRσ之间的关系，将CS和PTPRσ之间的键在A中识别出来。接下来，当药物A，B和PTPRσ之间的反应性在同骨滴定量热法（ITC）中检查时，A在A中识别出A。另外，将EGFR细胞结构域与PTPRσ的细胞外域结合在一起，该嵌合受体可以通过独立于磷酸化（WB）（WB）（WB）确定EGFR的磷酸化来确定PTPRσ的细胞外态。，考虑了PTPRσ是否会大量数量的药物A和B。此外，众所周知，PTPRσ是一种剂型酶，在CS中激活，并使用HEK293T用V-SRC磷酸化，然后使用ptprσ进行dug氧化剂量。，A。接下来，将小鼠背根神经节（DRG）培养在涂有硫酸软骨素（CSPG）的培养基上进行，如果用药物A培养它，则无法在CSPG上拉伸的轴搜索将克服CSPG并延伸。我是。在体外，与药物A合成寡核HS的轴向再生作用相同。将来，我们计划在体内进行实验。