抗糖脂質モノクローナル抗体のイヌ型抗体化とメラノーマ治療への応用

犬抗糖脂单克隆抗体的形成及其在黑色素瘤治疗中的应用

基本信息

批准号：
18658123
负责人：
大橋和彦
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18658123/
关键词：
糖脂質メラノーマメノラーマ

项目摘要

糖脂質を標的分子とした新規の抗腫瘍療法を開発することを目的として研究として研究を行った。今年度は、平成18年度に調製し、腫瘍細胞、特にイヌ由来メラノーマ細胞株との反応性を確認した各種糖脂質に対するマウスモノクローナル抗体(MAb)パネルのうち、細胞株に広範に反応した抗GM3 MAb(クローンNo.2-14)について、さらに解析を行った。その結果、このクローンMAbは、非常に多くのメラノーマ細胞株に対して試験管内で細胞傷害性を有していることを見出した。また種々のメラノーマ可移植性細胞株を皮下に移植したヌードマウスを用いた治療試験でも、MAbの連続投与により、移植腫瘍の生育が抑制されることが示された(ただし、対照群と治療群の間に統計学的有意差は検出されなかった)。以上より、in vivoにおいても抗GM3 MAbが抗腫瘍効果を発揮できることがマウスモデルで証明された。昨年度に、抗GM3 MAb(クローンNo.2-14)の抗原結合部位である超可変領域(抗原特異性決定部位)の塩基配列を決定し、イヌ型抗体化を目指して遺伝子発現ベクターへ挿入するため、遺伝子カセットをH鎖・L鎖それぞれにおいて作成したが、今年度は、さらに組み換えイヌ型抗糖脂質MAbの臨床応用を目的として、作成した遺伝子カセットをH鎖・L鎖のバキュロウイルス発現系を用いた組み換えイヌ型抗GM3 MAbの大量発現系の樹立を試みた。しかしながら、その発現量は、あまり高くないことが判明した。発現したL鎖とH鎖について、そのGM3との結合活性を確認したが、単独では結合せず、組み換えL鎖およびH鎖の会合した分子を調製する必要性が示唆された。今後、spacerなどでL鎖およびH鎖を結合した遺伝子を調製し共発現させる系を検討する。

这项研究的目的是开发一种使用糖脂作为靶分子的新型抗肿瘤疗法。今年，我们选择了抗 GM3，它是 2006 年制备的一组针对各种糖脂的小鼠单克隆抗体 (MAb)，其与肿瘤细胞，特别是狗源性黑色素瘤细胞系的反应性已得到证实（克隆 2 号）。 -14) 进一步分析。结果发现，该克隆的MAb在体外对大量黑色素瘤细胞系具有细胞毒性。此外，使用皮下移植多种黑色素瘤移植细胞系的裸鼠进行的治疗试验表明，持续给予MAb可抑制移植肿瘤的生长（然而，移植肿瘤的生长在对照组和治疗组中均受到抑制。没有统计学上的显着差异。之间检测到由此可见，在小鼠模型中，抗GM3 MAb即使在体内也能发挥抗肿瘤作用。去年，抗GM3确定作为MAb(克隆号2-14)的抗原结合位点的高变区(抗原特异性决定位点)的核苷酸序列，并将基因盒插入基因表达载体中，目的是产生我们已经创建了H链和L链的基因盒，今年，我们将使用H链和L链型杆状病毒表达系统，使用重组犬抗糖脂单克隆抗体进一步开发重组犬抗糖脂单克隆抗体。 -GM3我们试图建立 MAb 的质量表达系统。然而，发现其表达水平不是很高。我们确认了表达的L链和H链与GM3的结合活性，但它们并不单独结合，这表明需要制备重组L链和H链结合的分子。将来，我们将研究使用间隔区组合 L 链和 H 链的共表达基因的系统。