真核生物リボソームリサイクリングの解明

真核核糖体回收的阐明

基本信息

批准号：
18657043
负责人：
星野真一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18657043/
关键词：
遺伝学遺伝子発現リボソーム翻訳

项目摘要

真核生物の翻訳終結においては、終止コドンを直接認識する翻訳終結因子eRF1がリボソームA部位に入り込み、ペプチジルトランスフェラーゼを活性化することでペプチジルtRNAからペプチド鎖の解離を引き起こし翻訳が終結する。その際第二の翻訳終結因子eRF3はeRF1をリボソームに運搬する役割を担っている。一方、原核生物においては真核生物のeRF1/eRF3に相当する翻訳終結因子RF1,2/RF3が同様に翻訳終結反応を担っているが、翻訳終結後RF1,2と同様なtRNA用構造を有するリボソームリサイクリング因子がリボソームA部位に入り込み、翻訳終結後のリボソームをmRNAから解離させる役割を果たしている。環状構造を有する真核生物mRNAにおいてもそのようなリサイクリング因子が働く可能性が充分考えられ、真核生物リサイクリング因子の実態解明にむけて解析を行なった。本研究において申請者らは、(1)リサイクリング因子の候補として、翻訳終結因子eRF1と構造上高い相同性を有するeRFLをヒトにおいて同定し、(2)すでに報告されているeRF3相同因子eRFSと結合することを証明した。また、(3)両因子のポリソームプロファイル解析より、両者は共にポリソーム画分に局在することを証明した。(4)eRFLはeRF1と同様に単独でもリボソームに結合し、その結合はtRNAやeRF1の共存によりリボソームから解離することを見出した。従ってこれらの因子はeRF1/eRF3同様リボソームA部位において機能する因子である。一方で、(5)これらの因子のみでは、ポリソーム画分からリボソームを解離させる活性は検出できなかったことから、これらの因子と相互作用する第三の因子について探索を行ない、GAPDHを同定した。これらが3者複合体を形成しリサイクリングを制御する可能性についてHeLaのin vitro翻訳系を用いて検討中である。

在真核生物的翻译结束时，直接识别末端密码子，进入核糖体区域的翻译端因子ERF1将导致肽trNA散布肽链并结束翻译。当时，第二个翻译最终因子ERF3在将ERF1运输到核糖体方面起着作用。另一方面，在初级生物体中，翻译端因子RF1,2/RF3相当于Euclear Credure Erf1/Erf3，负责翻译最终反应，但在翻译后具有与RF1和2的tRNA结构相同核糖体回收因子进入了核糖体部分，并在翻译结束后扮演核糖体的作用。充分考虑了这种回收因子在mRNA中起作用的mRNA，并进行了分析，以阐明真核生物回收因子的现实。在这项研究中，申请人将（1）识别为回收因子的候选者，ERFL具有高度结构化的ERFL，其翻译最终因子ERF1，以及（2）ERF3局部因素ERF，这已经报告了将加入。此外，（3）这两个因素的多组谱分析证明，两者都部分定位在多元绘画中。（4）ERFL像ERF1一样单独粘结到核糖体上，发现由于tRNA和ERF1的共存，键与核糖体分离。因此，这些因素是核糖体部分A位点功能的因素，例如ERF1/ERF3。另一方面，（5）探索了仅这些因素无法检测到将核糖溶解在多层中风中的活性的事实，并且通过探索与这些因素的相互作用来鉴定GAPDH。这些正在研究使用HeLa的体外翻译形成三个人的复合物并控制回收的可能性。