トランスジェニック鳥類よる抗アレルギー卵の創製

使用转基因鸟类培育抗过敏蛋

基本信息

批准号：
18656245
负责人：
上平正道
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

花粉症や食物アレルギーの治療法として、エピトープペプチドの投与による減感作療法が有効であるとの報告がなされている。これはアレルゲンタンパク質のうち、T細胞が認識するアミノ酸配列(エピトープ)を取り出し、ペプチド(エピトープペプチド)として投与すると、この物質に対するアレルギー反応が中断されるというものである。本研究では、スギ花粉エピトープペプチドをニワトリで生産させ、エピトープペプチドを含有した卵を食べることでスギ花粉症の減感作療法に使うことを目的とした。そのためにまず、スギ花粉アレルゲンCry-j1およびCry-j2の7つの主要エピトープを1つにまとめたペプチド(7Crp)をコードする遺伝子配列をニワトリで繁用されるコドンで設計し、リゾチーム分泌シグナルの遺伝子配列とともに全合成した。次に、この遺伝子配列を抗体定常領域(Fc)やリゾチームとの融合タンパク質として発現するように組み込んだレトロウイルスベクター生産用プラスミドを作製した。293FT細胞を用いてレトロウイルスベクターを生産したところ、10^7-9IU/mlの高力価のウイルス溶液を得ることができた。このウイルスベクターによる遺伝子導入でエピトープペプチドの生産が行えるかを検討するために、293細胞やCHO細胞へ遺伝子導入したのち、ウェスタンブロット法によってエピトープペプチドを検出したところ、これらの動物細胞でエピトープペプチドの生産を確認することができた。次に、このウイルスベクターを使ってニワトリ胚へ遺伝子導入することによって、エピトープペプチドを生産するニワトリの作製を試みた。9個の胚へ遺伝子導入処理を行い、胚培養によって4羽のヒナを孵化させることができた。3週齢の時点で採血し血中にエピトープペプチドが生産されているかについて検討したところ、エピトープペプチドの生産を確認することができた。

据报道，通过给予表位肽的脱敏治疗是有效的，作为干草热和食物过敏的治疗方法。这意味着，如果提取并用作T细胞在过敏原蛋白中识别的氨基酸序列（表位）并作为肽（表位肽）施用，则对该物质的过敏反应中断。这项研究旨在在鸡中产生雪松花粉表位肽，并通过食用含有表位肽的鸡蛋来将其用于脱敏治疗雪松干草热。为此，最初是用鸡通常使用的密码子设计的，该基因序列编码编码肽（7CRP），该基因结合了雪松花粉过敏原CRY-J1和CRY-J2的七个主要表位，然后与鸡分泌信号的基因序列合成。接下来，制备用于产生逆转录病毒载体的质粒，其中将该基因序列掺入，以表达为抗体常数区域（FC）或带有溶菌酶的融合蛋白。使用293英尺细胞产生逆转录病毒载体，并获得了10^7-9IU/mL的高滴度病毒溶液。为了研究是否可以使用该病毒载体通过基因转移产生表位肽，然后通过蛋白质印迹检测到基因转移到293个细胞中，并在这些动物细胞中证实了表位肽的产生。接下来，我们试图通过使用该病毒载体将基因转移到鸡肉胚胎中来产生产生表位肽的鸡。在九个胚胎上进行了基因转移处理，四只小鸡能够通过胚胎培养。当在3周龄收集血液时，是否检查了血液中的表位肽时，可以确认表位肽的产生。