新規の水性二相分配抽出法による細胞の特異的分離法の開発

使用新型水相分配萃取方法开发特定细胞分离方法

基本信息

批准号：
06650911
负责人：
上平正道
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

a-アミラーゼに対するモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ16-3F株、ミエローマNS-1株、脾細胞などの細胞を用いて、種々の水性二相系での分配について調べたところ、塩をあまり含まない系では、細胞は上相に分配される傾向にあった。系への塩の添加によって細胞は凝集ぎみになり、上相から排除されて界面や下相に分配するようになった。16-3F細胞の特異的な分配を検討するために、pH変化により溶-不溶状態を制御できかつ水性二相系で上相に分配するポリマーであるEudragitに、a-アミラーゼあるいは抗マウスIgG抗体をリガンドとして結合させ、PEG8000-Dextran T500水性二相系に導入した。Eudragitを導入しない系では塩がない場合、細胞は上相に分配したが、リガンドを固定したEudragitを導入することによって、上相の割合が低下し界面への分配が多くなった。しかし塩を加えることによって上相への分配の割合は増加した。この塩を入れた条件では、Eudragitを入れない場合およびリガンドを結合していないEudragitを入れた場合は、細胞は下相に分配されることからリガンド固定によって選択的な分配が行えたものと考えられた。また系に導入したリガンド固定Eudragit濃度を増すにつれて、細胞の上相への分配が増加した。リガンドを固定したEudragitの使用で目的細胞の上相への分配を促進できることがわかったので、つぎに細胞混合物からの分離を試みた。16-3F細胞とその親株であるNS-1細胞の細胞混合物にa-アミラーゼを固定化したEudragitをふくむPEG8000-Dextran T500系を添加したところ、16-3F細胞が選択的に上相に分配され、本研究で開発した分離系は、細胞混合物からも目的細胞を分離可能であることがわかった。

当使用诸如杂交瘤16-3F菌株的细胞，NS-1菌株和脾细胞进行研究，以研究各种双相系统中的分布，这些系统产生针对a-淀粉酶的单克隆抗体时，细胞倾向于在不含很多盐的系统中分布在上层中。在系统中添加盐，使细胞结成凝聚，并从上层消除并分布到界面和下层。为了研究16-3F细胞的特定分区，将A-淀粉酶或抗小鼠IgG抗体偶联为Eudragit的配体，Eudragit是一种能够通过更换pH和分配到上相的聚合物来控制裂解液状态的聚合物，并将其在水溶液系统中划分为PEG8000-DEXAS t50000 aque t50000 aque t50000 aque art t50000 aque ars t500 airan t50000 airial t50000 airial t500 airist ariat airan airan air air air airan airan airan airan airan airan air ique。在没有Eudragit的系统中，当没有盐时，将细胞分布到上层，但是通过将eudragit引入eudragit，用固定的配体固定，上相的比例减少，分布到界面的分布增加。但是，盐的添加增加了分区的比例到上层。在添加这种盐的条件下，当不包括Eudragit或添加没有配体结合的Eudragit时，将细胞分布在较低的相，因此可以通过配体固定来实现选择性分布。此外，随着引入系统中的配体固定eudragit的浓度增加，细胞向上相的分布增加。已经发现，使用配体 - 毫米化的Eudragit可以促进靶细胞分布到上层，然后尝试与细胞混合物分离。 When the PEG8000-Dextran T500 system including Eudragit, which immobilized a-amylase, was added to the cell mixture of 16-3F cells and its parental strain NS-1 cells, the PEG8000-Dextran T500 system including Eudragit, which has been immobilized with a-amylase, was selectively distributed in the upper phase, and it was found that the separation system developed in this study could separate the target cells from细胞混合物也是如此。