水晶体発育期のクリスタリン構造調節因子:SPring-8X線回折による統合的解析

镜片开发过程中的晶状体蛋白结构调节剂：使用 SPring-8 X 射线衍射进行综合分析

基本信息

批准号：
17659548
负责人：
毛利聡
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659548/
关键词：
水晶体クリスタリン X線回折ナトリウムカルシウム交換体

项目摘要

発達期ラット水晶体を用いて、主成分蛋白であるクリスタリンの分子構造がどのような調節を受けて透明性。高屈折性という特性を獲得するかを生化学的解析及びX線回折による構造評価により検討した。生後5日、10日、15日で水晶体蛋白濃度を測定したところ、それぞれ274±40、347±42、569±61[mg/lens vol.]であった。X線回折では、5日では散乱のみが観察され、10日より直径15[nm]程度のクリスタリン会合粒子によると考えられる回折像が出現し、15日では成ラットと同様なリング状の回折像が完成した。一般に蛋白は高濃度になると凝集しやすいが、発達期水晶体は成長に伴う蛋白濃度上昇とともに低温に対して凝集を免れる機構を獲得する。X線回折像により、この低温白内障惹起時の分子構造を検討したところ、クリスタリン会合粒子径は変化しておらず、より小角の位置で観察される粒子間相互作用の変化により低温白内障が起きることが示唆された。クリスタリン会合粒子の構造(直径約15nm、40量体)形成メカニズムの候補として各種クリスタリンの比率の変化に着日して、ラット水晶体に存在するαA、αB、β、γクリスタリン抗体を用いて水晶体連続切片を染色して検討した。水晶体は球面収差補正のため中心部の蛋白濃度がいが、クリスタリン抗体による染色では中心部が薄染となる傾向であった。これは中心部ほど会合粒子を形成して抗体接着を阻害することが原因と考えられ、抗体染色によるクリスタリン比率の違いを求めることは出来ず、現在ブロッティングによる解析を進めている。また、会合粒子の構造因子候補としてカルシウム代謝について調べるため、成長に伴うナトリウム-カルシウム交換体(NCX)の分布について検討した。その結果、会合粒子の主成分とされるαBクリスタリンとNCXの分布が非常に似ていることを発見した。

使用发育大鼠透镜，主要成分蛋白质的分子结构受调节和透明。是否获得了使用X射线衍射的生化分析和结构评估来研究高折射率的性质。当晶状体蛋白浓度在出生后5、10和15天测量时，它们分别为274±40、347±42和569±61 [mg/lens vol。]。在X射线衍射中，仅在5天观察到散射，从第十次出现了衍射图像，这被认为是由直径约为15 nm的结晶蛋白相关的颗粒引起的，在第15 nm，在15th，一个与成年大鼠相似的环形衍射图像。通常，蛋白质倾向于在高浓度下凝聚，但是发育镜头获得了一种机制，该机制随着蛋白质浓度的增加而在低温下避免凝聚的机制。当我们在使用X射线衍射图像诱导这种低温性白内障时研究了分子结构时，建议与结晶蛋白相关的粒径没有变化，并且在较小角度观察到的颗粒相互作用的变化会导致冷感应性caltaracta canaracts。在当天引入了各种晶体蛋白作为候选晶体相关颗粒结构的比例变化，使用αA，大鼠透镜中存在的αA，αB，β和γ晶体抗体对串行透镜切片进行染色。由于球形像差校正，镜头趋于在中央区域具有蛋白质浓度，但用晶体蛋白抗体染色倾向于在中央区域呈较薄的染色。这被认为是由中心中相关颗粒形成以抑制抗体粘附的原因，并且不可能确定由于抗体染色而导致的结晶蛋白比差异，并且目前正在通过印迹进行分析。此外，为了研究钙代谢作为相关颗粒的候选结构因子，我们研究了钠钙交换器（NCX）的分布以及生长。结果，我们发现是相关粒子的主要成分的αb晶体和NCX的分布非常相似。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

X-ray diffraction and biochemical analysis of α-Crystallin in developing rat lens

大鼠晶状体发育过程中α-晶状体蛋白的 X 射线衍射和生化分析

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
SPring-8利用報告書 2006A
影响因子：
0
作者：
Mohri S;Yagi N;Morizane Y;Nakayama M
通讯作者：
Nakayama M

Iris movement mediates vascular apoptosis during rat pupillary membrane regression.

DOI：
10.1152/ajpregu.00602.2005
发表时间：
2006-03
期刊：
American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology
影响因子：
0
作者：
Y. Morizane;S. Mohri;J. Kosaka;S. Toné;T. Kiyooka;T. Miyasaka;J. Shimizu;Y. Ogasawara;F. Shiraga;Y. Minatogawa;J. Sasaki;H. Ohtsuki;F. Kajiya
通讯作者：
Y. Morizane;S. Mohri;J. Kosaka;S. Toné;T. Kiyooka;T. Miyasaka;J. Shimizu;Y. Ogasawara;F. Shiraga;Y. Minatogawa;J. Sasaki;H. Ohtsuki;F. Kajiya