髄膜とPA6との比較検討によるドーパミン産生神経誘導能の解明

通过脑膜和 PA6 的比较研究阐明多巴胺产生神经诱导能力

基本信息

批准号：
17659442
负责人：
高橋淳
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659442/
关键词：
ES細胞神経誘導ドーパミン産生神経

项目摘要

ES細胞からドーパミン産生神経を誘導する方法として、SDIA(Stromal cell-Derived Inducing Activity)法および5 step法が知られている。前者は後者に比べ手順が簡便でより多くのドーパミン産生神経を得られる点で優れているが、マウス由来フィーダー細胞を使うのでマウスの病原体や遺伝子が移植の際に混入する可能性があり、このままでは臨床応用はできない。そこで我々は、SDIA法における重要な要素を抽出及び同定し、マウス細胞を使用しない新しい方法を開発した。SDIA法は新生マウス頭蓋骨由来のPA6細胞をフィーダーとしてES細胞を播種し、コロニーを形成させることでドーパミン産生神経を誘導させる方法である。我々は、マウス胎児由来髄膜細胞との共培養によっても、ドーパミン産生神経誘導が可能なことを明らかにした。神経誘導活性の主な要妻として、細胞外基質及び液性因子の2つが考えられる。ドーパミン産生神経の分化過程に作用する液性因子のうち髄膜細胞とPA6細胞に共通して発現するものを検索したところ、Wnt5aとTGFβ3の2つが見つかった。髄膜細胞によるドーパミン産生神経誘導活性は胎児のステージによって違い、この活性の強さとWnt5aの発現量に相関関係がみられたことから、SDIAにおいてWnt5aが重要な働きをしていると考えられた。

从ES细胞诱导多巴胺产生神经的方法称为SDIA（基质细胞衍生的诱导活性）和5个步骤方法。前者优于后者，因为该过程更简单，并且获得了更多的多巴胺神经，但是使用了小鼠来源的喂食器细胞，因此在移植时可能会混合病原体和基因。。因此，我们在SDIA方法中提取并确定了重要元素，并开发了不使用小鼠细胞的新方法。 SDIA方法是一种从新的小鼠头骨作为进料器的PA6细胞中播种ES细胞的方法，并形成菌落以诱导多巴胺产生神经。我们已经揭示了多巴胺生产神经性诱导多巴胺生产神经系统也可以与小鼠胎儿脑膜细胞一起使用。作为神经诱导活性的主要端庄妻子，可以考虑两种类型的细胞外和液体因素。在搜索与脑膜和PA6细胞共有的多巴胺产生神经分化的液体因子后，发现了两种类型的Wnt5a和TGFβ3。脑膜细胞产生的神经诱导活性取决于胎儿阶段，并且该活动的强度与WNT5A的表达之间的相关性在SDIA中很重要。