悪性黒色腫幹細胞と色素細胞特異的ABCB5の生物学的・臨床的意義の解明

阐明恶性黑色素瘤干细胞和色素细胞特异性 ABCB5 的生物学和临床意义

• 批准号: 17659343
• 负责人: 河上 裕
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659343/
• 关键词: 癌幹細胞; 悪性黒色腫; ABCトランスポーター; DNAチップ; 抗がん剤耐性

本研究の目的は、悪性黒色腫幹細胞と新規色素細胞特異的ABCトランスポーターABCB5の解明である。悪性黒色腫癌幹細胞を分離するために、細胞表面抗原法、sphere形成法、side population(SP)法(Hoechst 33342排出能)等を試み、悪性黒色腫培養細胞株16株中8種でSP細胞を同定した。本年度は、SP細胞の機能解析、分子発現解析を進めた。FACSによりsingle cell sortingしたSP細胞は様々な幹細胞で発現するABCG2を高発現し、MP細胞からはMP細胞しか増殖しなかったのに対して、SP細胞からはSP・MP両細胞が出現するという非対称性増殖が示された。免疫不全マウスの皮下移植において、SP細胞はMP細胞と比べて低い細胞数で高腫瘍形成能を示し、この悪性黒色腫SP細胞は癌幹細胞様の性質をもつことが判明した。また、SP細胞は、抗癌剤mitoxantroneやdocetaxelに対して抵抗性であった。そこで、GeneChipによる網羅的遺伝子発現解析を行ない、SP細胞、MP細胞それぞれに高発現する遺伝子群を同定したが、ABCB5の発現差は認められなかった。ABCB5の細胞表面蛋白発現を検討するために、2回、抗ABCB5抗体の作成を試みたが、まだ、生細胞上のABCB5を検出できる抗体は得られていない。以上より、現時点では、ABCB5と悪性黒色腫幹細胞と関連は認められていないが、本研究で得られた悪性黒色腫幹細胞様SP細胞の解析が進んでおり、今後、それを標的とした診断や治療の開発の可能性が示された。

本研究的目的是阐明恶性黑色素瘤干细胞和新型色素细胞特异性 ABC 转运蛋白 ABCB5。为了分离恶性黑色素瘤癌干细胞，我们尝试了细胞表面抗原法、球体形成法、侧群（SP）法（Hoechst 33342排泄能力）等，结果发现16个培养的恶性黑色素瘤细胞系中有8个被鉴定为SP细胞。今年，我们对SP细胞进行了功能分析和分子表达分析。通过FACS分选的单细胞SP细胞高表达ABCG2，其在多种干细胞中表达，并且仅MP细胞从MP细胞增殖，而SP和MP细胞都出现从SP细胞不对称生长。当皮下移植到免疫缺陷小鼠体内时，SP细胞显示出较高的肿瘤形成能力，且细胞数量比MP细胞低，并且发现这些恶性黑色素瘤SP细胞具有癌症干细胞样特性。此外，SP细胞对抗癌药物米托蒽醌和多西他赛具有耐药性。因此，我们使用GeneChip进行了全面的基因表达分析，并鉴定了一组在SP细胞和MP细胞中高表达的基因，但没有观察到ABCB5表达的差异。为了检测ABCB5的细胞表面蛋白表达，我们两次尝试制备抗ABCB5抗体，但尚未获得可以在活细胞上检测ABCB5的抗体。综合以上，目前尚未发现ABCB5与恶性黑色素瘤干细胞之间的关系，但本研究获得的恶性黑色素瘤干细胞样SP细胞的分析正在取得进展，未来有可能证明了开发治疗方法的可能性。

项目成果

Systematic identification of human melanoma antigens using serial analysis of gene expression (SAGE)

• DOI: 10.1097/00002371-200501000-00002
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: JOURNAL OF IMMUNOTHERAPY
• 影响因子: 3.9
• 作者: Matsuzaki, Y;Hashimoto, S;Kawakami, Y
• 通讯作者: Kawakami, Y

A new melanoma antigen FABP7 involved in proliferation and invasion is a potential target for immunotherapy and molecular target therapy

一种参与增殖和侵袭的新黑色素瘤抗原FABP7是免疫治疗和分子靶向治疗的潜在靶点

• 期刊: Cancer Res in press
• 作者: Goto Y;Kawakami Y;et al.
• 通讯作者: et al.

Effective inhibition of cell growth and invasion of melanoma by combined suppression of BRAF (V599E) and Skp2 with lentiviral RNAi

• DOI: 10.1002/ijc.21286
• 发表时间: 2006-01-15
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER
• 影响因子: 6.4
• 作者: Sumimoto, H;Hirata, K;Kawakami, Y
• 通讯作者: Kawakami, Y