サイトカイン活性を有する核転写因子、ヌクレオサイトカインの情報伝達と敗血症病態

具有细胞因子活性、核细胞因子信号转导和脓毒症病理学的核转录因子

基本信息

批准号：
17659159
负责人：
西堀正洋
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659159/
关键词：
敗血漿ヌクレオサイトカインウエスタンブロット

项目摘要

臨床的に敗血症と診断された下部消化管穿孔を中心とした患者に使用されたポリミキシンB固相化カラムを回収し、氷冷生食1500mlで洗浄後、カラムを開封しフィルターを取り出した。生食中でシェアストレスをかけることによってフィルター付着細胞を除去した後、フィルターに結合しているタンパク因子を飽和硫酸アンモニウム、グリシン-塩酸緩衝液(pH4.0)で連続して溶出した。溶出分画を回収後、バッファー交換し濃縮した。回収された分画におけるヌクレオサイトカインを特異抗体を用いて検出したところ、飽和硫安による回収分画にヌクレオサイトカインが存在することが明らかにされた。カラムからは大量の白血球細胞が回収された。これらの白血球をFCS不含RPMI1640でインキュベートすることによってインキュベーション上清を得た。タンパク成分を硫安沈殿で回収し、透析後ヌクレオサイトカインの存在をウエスタンブロットで確認した。抗ヌクレオサイトカイン抗体をアガロースビーズに共有結合させ、このアフィニティ担体に上記のポリミキシンフィルターからの回収タンパク質ならびに白血球細胞のインキュベーション上清をアプライした。標準品ヌクレオカインは、この抗体アフィニティカラムに結合したが、インキュベーション上清中のヌクレオカインは結合性を示さなかった。このことからヌクレオカインの翻訳後化学修飾、複合体形成、結合阻害物質の存在等の可能性が強く示唆させた。

收集临床诊断为败血症的患者中使用的多粘蛋白B固定柱，主要用于胃肠道较低的穿孔，并用1500 mL冰冷的原始饮食洗涤，然后打开并过滤。通过在生食中进行剪切应力去除过滤器附着的细胞后，用饱和硫酸铵，甘氨酸 - 氢核酸缓冲液（pH 4.0）依次洗脱了与过滤器结合的蛋白质因子。收集洗脱的馏分后，将混合物交换并浓缩。使用特定的抗体检测到回收的馏分中的核细胞因子，并发现使用饱和硫酸铵的核细胞因子存在核细胞因子。从色谱柱收集大量白细胞细胞。通过将这些白细胞与无FCS RPMI1640孵育，可获得孵育上清液。通过硫酸铵沉淀收集蛋白质成分，透析后，通过蛋白质印迹证实了核细胞因子的存在。将抗核细胞因子抗体共价结合与琼脂糖珠，并将亲和力载体从多粘质过滤器以及白细胞细胞中施加到回收蛋白的孵育上清液中。与该抗体亲和力柱结合的标准核子，但是孵育上清液中的核子没有结合。这强烈表明，核定，复合物形成和结合抑制剂的存在后化学改性后的可能性。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

alpha 1-Adrenergic receptor antagonists induce production of IL-8 and expression of ICAM-1 and CD40 in human monocytes.

α1-肾上腺素能受体拮抗剂诱导人单核细胞产生 IL-8 以及 ICAM-1 和 CD40 的表达。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J Immunother. 28
影响因子：
0
作者：
Takashima;M.;Dai H;Kuramasu A;Sakurai E;Jia F;Dai H;Jin CL;石井恵子;Takahashi HK et al.;Hamano R et al.;Takahashi HK et al.;Takahashi HK et al.;Takahashi HK et al.;Katsuno G et al.;Horton JR et al.;Takahashi KH et al.;Takahashi KH et al.;Takahashi KH et al.;Mizuno K et al.;Takahashi KH et al.
通讯作者：
Takahashi KH et al.

脳梗塞抑制剤

脑梗塞抑制剂

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

alpha7 Nicotinic Acetylcholine Receptor Stimulation Inhibits Lipopolysaccharide-Induced Interleukin-18 and -12 Production in Monocytes.

α7 烟碱乙酰胆碱受体刺激抑制脂多糖诱导的单核细胞中白细胞介素 18 和 -12 的产生。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
J Pharmacol Sci. 102
影响因子：
0
作者：
Takashima;M.;Dai H;Kuramasu A;Sakurai E;Jia F;Dai H;Jin CL;石井恵子;Takahashi HK et al.;Hamano R et al.;Takahashi HK et al.
通讯作者：
Takahashi HK et al.

Differential effect of LFA703, pravastatin, and fluvastatin on production of LI-18 and expression of ICAM-1 and CD40 in human monocytes.

LFA703、普伐他汀和氟伐他汀对人单核细胞中 LI-18 的产生以及 ICAM-1 和 CD40 表达的差异影响。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Journal of Leukocyte Biology. 77
影响因子：
0
作者：
Takashima;M.;Dai H;Kuramasu A;Sakurai E;Jia F;Dai H;Jin CL;石井恵子;Takahashi HK et al.;Hamano R et al.;Takahashi HK et al.;Takahashi HK et al.;Takahashi HK et al.;Katsuno G et al.;Horton JR et al.;Takahashi KH et al.;Takahashi KH et al.;Takahashi KH et al.
通讯作者：
Takahashi KH et al.

Hypothesis : the antitumor activities of statins may be mediated by IL-18.

假设：他汀类药物的抗肿瘤活性可能是由 IL-18 介导的。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
J Leukoc Biol. 80
影响因子：
0
作者：
Takashima;M.;Dai H;Kuramasu A;Sakurai E;Jia F;Dai H;Jin CL;石井恵子;Takahashi HK et al.;Hamano R et al.;Takahashi HK et al.;Takahashi HK et al.
通讯作者：
Takahashi HK et al.