ヒト歯根膜細胞による破骨細胞抑制因子(OPG)の発現量を増大させる物質は何か?

什么物质可以增加人牙周膜细胞破骨细胞抑制因子（OPG）的表达？

• 批准号: 16659524
• 负责人: 前田 英史
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659524/
• 关键词: ヒト歯根膜細胞; LPS; OPG; RANKL; ルシフェラーゼアッセイ

(1)レポーターベクターの作製ヒト骨芽細胞株SaOs2のDNAを抽出し、過去に活性が高いことで報告されているOPGのプロモーター領域(2kbp)(Thirunavukkarasu et al. J Biol Chem 276:39,36241,2001)をPCRにて増幅し、その後Renillaルシフェラーゼベクターとライゲーションを行いOPGのレポーターベクターの作製に成功した。またRANKLについては、Reddy博士(サウスカロライナ医科大学)よりFirenyルシフェラーゼベクターにプロモーター領域(2kbp)をライゲーションしたベクターの供与を受けた。(2)歯根膜細胞への遺伝子導入抜去した歯牙より得られた歯根膜から培養皿上へ遊離してきた細胞に、OPGまたはRANKLのレポーターベクターをコントロールベクターと共に同時に遺伝子導入する。その際、プライマリーの細胞の核に高い導入効率を有し、さらに導入の際に生じる死細胞の数が圧倒的に少ないという実績を持つ遺伝子導入装置(AMAXA)を用いた。(3)レポーターアッセイ遺伝子導入したヒト歯根膜細胞にLypopolysaccharide(LPS)を添加し、OPGおよびRANKLの発現について今回購入したルミノメーターを用いてアッセイを行ったところ、OPG, RANKLともに発現が誘導されるが、OPGの方がより多く合成されていることが明らかになった。今後さらに、これらのプロモーターに結合する転写因子について解析し、歯根膜細胞に働くLPSの情報伝達機構について解明することで、細菌感染による炎症の拡大を防ぐことができる新薬の開発につなげていこうと考えている。またこのような作用を持つ物質を歯科材料に配合することで、逆根管充填剤への応用についても検討している。(今回の研究は九州大学歯学研究院の生命倫理委員会にて認可されている)

(1)制备报道载体DNA，从人成骨细胞系SaOs2中提取，提取OPG的启动子区域(2kbp)，该区域在过去被报道具有高活性(Thirunavukkarasu等人，J Biol Chem 276： 39,36241, 2001)通过PCR扩增，然后与Renilla荧光素酶载体连接，成功构建OPG报告载体。关于RANKL，由Reddy博士(南卡罗来纳医科大学)提供了启动子区域(2kbp)与Fireny荧光素酶载体连接的载体。 (2)向牙周膜细胞中导入基因将OPG或RANKL报告载体和对照载体同时导入从从拔牙获得的牙周膜释放到培养皿上的细胞中。这次，我们使用了基因转移装置（AMAXA），该装置具有高效率导入原代细胞核的记录，并且在转移过程中产生的死细胞数量极少。 (3)报告基因测定向已导入基因的人牙周膜细胞中添加脂多糖(LPS)，使用本次购买的光度计测定OPG和RANKL的表达，诱导OPG和RANKL的表达。然而，很明显合成了更多的 OPG。未来，我们将进一步分析与这些启动子结合的转录因子，阐明LPS作用于牙周膜细胞的信息传递机制，从而开发出能够阻止细菌引起的炎症扩散的新药物。我在想感染。我们还在研究将具有这种效果的物质掺入牙科材料中并将其应用于倒置根管填充物的可能性。 （本研究得到九州大学齿科研究所生命伦理委员会的批准）

项目成果

Fibroblastic cells from human periapical granulation tissue preferentially form calcified matrices in decalcified and boiled rat bone.

来自人根尖肉芽组织的成纤维细胞优先在脱钙和煮沸的大鼠骨中形成钙化基质。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cell and Tissue Research (in press)
• 作者: Uinuk-Ool TS;Nikolas N;Sato A;Mayer WE;Klein J;佐藤哲二;Maeda et al.
• 通讯作者: Maeda et al.

Lipopolysaccharide stimulates osteoprotegerin and receptor activator of NF-kappa B ligand in periodontal ligament fibroblasts through the induction of IL-1 beta and TNF-alpha.

脂多糖通过诱导 IL-1 β 和 TNF-α 刺激牙周膜成纤维细胞中的骨保护素和 NF-κ B 配体受体激活剂。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Bone 35(3)
• 作者: Wada et al.