ヒト不死化歯根膜細胞の作成とクローニング及び歯根膜細胞に特異的な分子の検出

人永生化牙周膜细胞的创建和克隆以及牙周膜细胞特异性分子的检测

• 批准号: 15689024
• 负责人: 前田 英史
• 金额: $ 11.48万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15689024/
• 关键词: ヒト歯根膜細胞; 不死化; hTERT; SV40T抗原; クローン細胞; β-TCP; SCIDマウス; ヒト歯肉線維芽細胞; 不死化歯根膜細胞; DNAマイクロアレイ; type IV collagen; 半定量RT-PCR; 歯根膜細胞; telomerase reverse transcriptase; PLAP-1; Runx2; EGFR; ALP; OPN; RT-PCR

ヒト歯根膜クローン細胞のキャラクタリゼーション昨年度までの研究において、報告者は正常なヒト歯根膜細胞にSV40 large T抗原及びヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)を遺伝子導入した結果、初代の細胞と同様の表現型を有し、かつ分裂数が120を超えても依然として増殖能を示すヒト不死化歯根膜細胞が得られたことを報告した。今回この細胞を限外希釈法にてクローニングし20種類のクローン細胞を得た。この中で、未熟な歯根膜細胞のマーカーとして報告されているSTRO-1またはCD146を発現している3種のクローン細胞(1-4,1-11,1-24)を選択した。これらのクローン細胞は、石灰化能を有し、また骨関連タンパク(RUNX2,Col1,OPN,OCN,RANKL,OPG)そして腱関連タンパク(EphA4,scleraxis,Six1,COMP)のmRNAを発現しており、オリジナルの初代細胞の表現型を維持していた。このうち1-11細胞はSTRO-1及びCD146を共に発現しており、他のクローン細胞と比較して未熟な細胞であることが示唆されたことから、この細胞をβ-TCPと共にSCIDマウスの背部皮下に移植し4週間後に観察したところ、β-TCP周囲に石灰物を形成していた。次にこの組織を摘出し、RT-PCR法にて、最近セメント芽細胞に強く発現することが報告されているCP-23(Antonio et al., Bone, 2005)、そして歯根膜に強く発現するPeriostinについて調べた結果、これらのmRNAを強く発現していたことから、1-11によって形成された石灰化物はセメント質に極めて近いものであると考えられる。歯根膜の再生機構の解明には、セメント質の再生が重要な課題となっており、今回の研究で得られた細胞は有用性の高い細胞株であると思われる。また、CP-23はセメント質の研究のための鍵となる因子として捉えることができると考えている。(今回の研究は九州大学歯学研究院の生命倫理委員会にて認可されている)

在直到去年的一项研究中，人类牙周韧带克隆细胞的表征都报告说，SV40大型T抗原和人端粒酶逆转录酶（HTERT）的基因转移到正常的人类牙周韧带细胞中的基因转移会导致人类永生细胞的牙周型，即使在这些细胞中相似，这些细胞也会超过这些细胞，即使这些细胞超过这些细胞，也会导致这些细胞超过这些细胞，即使用超稀释方法克隆以获得20种类型的克隆细胞。其中，选择了三个表达stro-1或CD146的克隆细胞（1-4,1-11,1-24），这些细胞已据报道为未成熟的牙周韧带细胞的标记。这些克隆细胞钙化并表达骨相关蛋白的mRNA（Runx2，Col1，Opn，OCN，RANKL，OPG）和肌腱相关蛋白（Epha4，Scleraxis，Six1，Comp），以维持原始主要细胞的表型。其中，1-11细胞同时表达stro-1和cd146，表明它们与其他克隆细胞相比是不成熟的细胞。当这些细胞与β-TCP一起植入时，四周后观察到它们，并在β-TCP周围形成少量。接下来，去除组织并研究了RT-PCR，以研究CP-23（Antonio等，Bone，2005），最近据报道，该组织在胶质细胞中强烈表达，骨素在牙周韧带中强烈表达，在牙周韧带中表达，并在1-11中形成了1-11所形成的钙化，并且在胶质性上非常接近胶结性，它们在胶质的属性上是强大的。牙骨质的再生是阐明牙周韧带再生机制的重要问题，本研究中获得的细胞被认为是非常有用的细胞系。我们还认为，可以将CP-23视为研究胶结特性的关键因素。 （这项研究得到了京都大学牙科学院生物伦理学委员会的批准。）

项目成果

Lipopolysaccharide stimulates osteoprotegerin and receptor activator of NF-kappa B ligand in periodontal ligament fibroblasts through the induction of IL-1 beta and TNF-alpha.

脂多糖通过诱导 IL-1 β 和 TNF-α 刺激牙周膜成纤维细胞中的骨保护素和 NF-κ B 配体受体激活剂。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Bone 35(3)
• 作者: Wada et al.

Establishing and characterizing human periodontal ligament fibroblasts immortalized by SV40T-antigen and hTERT gene transfer

• DOI: 10.1007/s00441-005-0101-4
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: CELL AND TISSUE RESEARCH
• 影响因子: 3.6
• 作者: Fujii, S;Maeda, H;Akamine, A
• 通讯作者: Akamine, A

Hidefumi Maeda et al.: "Human periapical granulation tissue contains osteogenic cells."Cell and Tissue Research. 315(2). 203-208 (2004)

Hidefumi Maeda 等人：“人类根尖周肉芽组织含有成骨细胞。”细胞和组织研究。