DNA修復欠損動物細胞を用いた環境化学物質のDNA損傷性の高感度評価

使用 DNA 修复缺陷的动物细胞对环境化学品的 DNA 损伤特性进行高度灵敏的评估

基本信息

批准号：
16655064
负责人：
川本卓男
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

現在、多くの化学物質が氾濫しているが、DNAに損傷を与えるものは、ガン化などの重篤な結果をもたらす危険性がある。したがって、化学物質のDNA損傷性の高感度な評価システムが求められている。しかし、従来法では、生物の持つ損傷修復機構などにより、高感度な評価は困難である。そこで、本研究では、DNA修復に関与する遺伝子を欠損さした株を用いることにより、高感度にDNA損傷性を評価しようと考えた。当研究室はDNA修復に関連する各種遺伝子をノックアウトしたいくつかの変異株を既に得ているが、さらにライブラリーの充実を図るため、高発癌性の遺伝疾患である色素性乾皮症バリアント群の責任遺伝子で、DNAの修復機構において重要な役割を果たしているDNAポリメラーゼη遺伝子等をノックアウトした変異株の作成を行った。これらの変異株を用いて、細胞間の情報伝達に関与する一方、発ガンへの関与が疑われている一酸化窒素(NO)のDNA損傷性の評価を行った。NO発生薬剤に対して、損傷乗り越えDNA合成(TLS)に関与するrev3の欠損株が高感受性を示し、染色体断裂も増加することが分かった。このことによりNOはDNAに損傷を与え、TLSによって誤った塩基を蓄積させ、発ガンの原因となると考えられた。また、抗がん剤であるシスプラチンはDNA架橋剤であるが、そのDNA架橋の修復機構はよく分かってないので、得られた変異株ライブラリーを用いて、この修復経路の検討を行った。その結果、TLSに関与する遺伝子rev3が重要で、次にファンコニ貧血遺伝子、三番目に、相同組換え遺伝子群が重要であることが分かった。

目前，许多化学物质正在洪水，但对DNA的损害会造成严重的后果，例如跳舞。因此，需要对DNA对化学物质损伤的高敏感评估系统。但是，在常规方法中，由于对生物的损害机制，很难评估高敏感性。因此，在这项研究中，我们打算通过使用缺乏DNA恢复基因的菌株来评估DNA损伤。该实验室已经获得了一些与DNA修复相关的基因的突变股，但是为了进一步增强图书馆，色素干燥的皮肤群，这是一种高度癌的ITINERIC疾病，我们创建了一个突变体。淘汰了DNA聚合酶η基因，该聚合酶在DNA恢复机制中起着重要作用。使用这些突变量，评估了氮（NO）的DNA损伤，该氮（NO）涉嫌参与细胞之间的信息。发现NO药物涉及损害DNA合成损害的Rev3赤字份额表现出较高的敏感性和增加的染色体撕裂。人们认为这会损害DNA，从而积累了TLS不正确的碱基，从而导致癌症。顺铂是一种抗癌药物，是一种DNA桥剂，但是DNA桥修复机制尚不清楚，因此我们使用获得的突变库检查了这种修复途径。结果，参与TLS的遗传REV3很重要，然后发现Fanconiic贫血组（第三个）是重要的同源重组基因。