アログラフト炎症因子-1の細胞工学的制御による先端的移植心動脈硬化治療法の開発

通过细胞工程控制同种异体移植物炎症因子-1开发先进的心脏动脉粥样硬化移植疗法

基本信息

批准号：
15659288
负责人：
藤井聡
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

研究室で樹立したマクロファージ系細胞にAIF-1を強制発現させたトランスジェニックマウスを用いて検討を進めた。(1)トランスジェニックマウスから抽出した腹腔マクロファージを用い蛍光標識したマイクロビーズおよび大腸菌の貪食能をフローサイトメトリー法による解析や分光吸光度計で評価した。AIF-1の発現量に比例して貪食能の亢進が認められ、AIF-1が細胞骨格に作用する機構を知る重要なモデルと考えられた。同定したマウスAIF-1の遺伝子配列を元に抗AIF-1 siRNAを合成し、AIF-1の抑制を行った。siRNAを作用させたマクロファージ系細胞株で貪食能の低下が認められ、貪食機能の調節におけるAIF-1の作用が明確となった。(2)動脈硬化とAIF-1の関係を検討するため、動脈硬化モデルマウスのApo E^<-/->マウスとAIF-1トランスジェニックマウスを交配しApo E^<-/-> AIF-1強発現マウスを作製した。このモデルマウスに通常食を食べさせ15週後に動脈硬化巣の面積を定量解析し対照群と比較した。Apo E^<-/-> AIF-1強発現マウスでApo E^<-/->マウスより動脈硬化の進展傾向が認められた。動脈硬化病巣形成にはマクロファージの貪食、泡沫化が深く関与しており、AIF-1がその貪食機能を調節する分子であることから、AIF-1は動脈硬化病巣進展を制御するメカニズムの一つと考えられた。AIF-1を強発現させた動脈硬化モデルマウスにおいては動脈硬化の進展が認められたため、今後は免疫組織化学染色によって病巣でのAIF-1の存在をより明確に証明すると同時に、マイクロダイセクション装置を用い、動脈硬化巣をスライド切片より選択的に切り出し、抽出したRNAを用いてリアルタイムPCRを行い病変部のサイトカインバランスの変化を確認する予定である。以前AIF-1を強制発現させたマクロファージ系細胞株をLPS刺激した際に動脈硬化抑制性サイトカインIL-6、IL-10の産生と動脈硬化促進性サイトカインIL-12の産生が亢進することを報告した。AIF-1強発現群で動脈硬化進展が認められ、AIF-1の存在が貪食以外に局所のサイトカインバランスを変化させている可能性がある。このことを確認するために、病巣局所のサイトカイン産生を強発現群と対照群で比較検討することは重要なので検討していく。

使用转基因小鼠在实验室建立的巨噬细胞上强迫AIF-1表达的转基因小鼠进行了研究。（1）通过流式细胞仪分析和光谱吸光度光谱仪，评估了使用从转基因小鼠中提取的腹膜巨噬细胞使用腹膜巨噬细胞标记的微粒和大肠杆菌的吞噬作用能力。与AIF-1的表达水平成比例地观察到吞噬作用增加，并且被认为是了解AIF-1在细胞骨架上作用的机制的重要模型。根据小鼠AIF-1的鉴定基因序列合成抗AIF-1 siRNA，并抑制AIF-1。在经受siRNA的巨噬细胞系中观察到吞噬作用的降低，并且阐明了AIF-1在调节吞噬作用方面的作用。（2）研究动脉粥样硬化与AIF-1，Apo e^< - / - >小鼠（模型动脉粥样硬化小鼠）的关系，以产生apo e^< - / - > AIF-1表达小鼠。该模型小鼠是正常饮食的喂食，15周后，对动脉硬化的面积进行了定量分析，并与对照组进行了比较。与apo e^< - / - >小鼠相比，Apo e^< - / - >表达AIF-1的小鼠表现出发展动脉硬化的趋势。动脉硬化病变的形成与巨噬细胞吞噬作用和泡沫深度有关，而AIF-1是调节其吞噬作用的分子，因此AIF-1被认为是调节动脉粥样硬化病变发展的机制之一。由于在强烈表达AIF-1的动脉粥样硬化模型中已经观察到了动脉硬化的进展，因此我们计划进一步清楚地证明通过免疫组织化学染色在病变处的AIF-1存在，同时，我们将选择性地将动脉菌株从slide切片中切除，并使用微置换设备来确认cytok cy cy cy cy cy中。以前，我们报道了LPS刺激的巨噬细胞系在动脉粥样硬化抑制性细胞因子IL-6和IL-10的产生中增强了AIF-1的增强，并且动脉粥样硬化启动子细胞因子IL-12的产生。在强烈表达AIF-1的组中观察到动脉粥样硬化的进展，AIF-1的存在可能会改变局部细胞因子平衡，除吞噬作用外。为了证实这一点，重要的是要比较和检查强表达组和对照组之间病变中的局部细胞因子产生，因此我们将考虑这一点。