タイトジャンクション構成分子Claudinを標的とした新規吸収促進戦略の確立

针对紧密连接组成分子Claudin建立新的吸收促进策略

• 批准号: 15659041
• 负责人: 近藤 昌夫
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Showa Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659041/
• 关键词: tight junction; claudin; in situ loop; C-CPE

本年度は、昨年度の結果を踏まえ、C-CPEの吸収促進作用におけるClaudin-4の関与を検証した。CPEはC末30アミノ酸を介しでClaudinと相互作用することが報告されていた(JBC,1991)。そこでCPEのC末アミノ酸16、30アミノ酸を欠損させたC-CPE303,C-CPE289を作成し、吸収促進活性およびClaudin-4との相互作用を検討した。分子量4000のデキストランをモデル薬物として用いたラット腸管ループ法によって変異型C-CPEの吸収促進活性を評価した。C-CPEは0.1mg/mlの処理で、無処理群の約20倍の吸収促進活性を有していたが、C-CPE303、C-CPE289は0.2mg/mlの濃度においても吸収促進活性は観察されなかった。ラット腸管溶解液を調整しNi-resinを用いたpull down assayを行ったところ、C-CPEではclaudin-4が沈降画分に検出されたのに対して、C-CPE289、C-CPE303ではclaudin-4の沈降は観察されなかった。ヒト腸管上皮細胞Caco-2細胞の単層膜培養系を用いて、transepithelial electric resistance(TER)を指標に上皮細胞層のバリアー機能に対する作用を検討したところ、C-CPEは濃度依存的、時間依存的にTERの低下作用を示していたが、C-CPE289、C-CPE303ではTERの低下作用は観察されなかった。Caco-2細胞の溶解液を用いたpull down assayにおいても、C-CPEとclaudin-4の相互作用は観察されたのに対して、C-CPE289およびC-CPE303では相互作用は認められなかった。以上の結果より、C-CPEの吸収促進活性にはclaudinとの相互作用が関与している可能性が示唆された。

今年，根据去年的结果，我们研究了Claudin-4参与C-CPE吸收促进作用。据报道，CPE通过C末端30氨基酸与Claudin相互作用（JBC，1991）。因此，制备了C-CPE303和C-CPE289，它们在C末端氨基酸16和30氨基酸中缺乏CPE，并研究了吸收活性以及与Claudin-4的相互作用。使用大鼠肠环方法评估突变体C-CPE的吸收增强活性，使用右旋烷的分子量为4000作为模型药物。 C-CPE的吸收增强活性约为以0.1 mg/mL处理未经处理的组的20倍，但即使在浓度为0.2 mg/mL的浓度下也观察到吸收增强活性。当制备大鼠肠裂解物并使用Ni-asin下拉分析时，C-CPE在沉积分数中检测到Claudin-4，而C-CPE289和C-CPE303并未沉淀Claudin-4。使用人类肠上皮细胞CACO-2细胞的单层培养系统，我们使用跨层电阻（TER）作为指标研究了上皮细胞层的屏障功能，并且C-CPE在TER中显示出浓度依赖性和时间依赖于TER，但在较低的cpe39和CPE中没有观察到较低的TER效果。在使用CACO-2细胞裂解物的下拉测定中，观察到C-CPE和Claudin-4之间的相互作用，而C-CPE289和C-CPE303之间未观察到相互作用。以上结果表明，与克劳丁的相互作用可能与C-CPE吸收活性有关。

项目成果

A novel strategy for the enhancement of drug absorption using a claudin modulator

• DOI: 10.1124/mol.104.008375
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: MOLECULAR PHARMACOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Kondoh, M;Masuyama, A;Watanbe, Y
• 通讯作者: Watanbe, Y