新しい造血肝細胞体外増幅法の実用化

新型造血肝细胞体外扩增方法的实际应用

基本信息

批准号：
12770557
负责人：
高橋宗春
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770557/
关键词：
造血幹細胞体外増殖レトロウイルス Notch HES 体外増幅アデノウイルス AGM

项目摘要

造血幹細胞の試験管内増幅は、現在の造血幹細胞移植療法を補完する上でも、また将来の遺伝子治療や人工血液の開発の上でも、極めて応用性の高い技術である。この技術開発を行う上で肝要なことは、いかにして分化させることなく幹細胞を増幅するかという点である。Notchは細胞膜受容体型の糖蛋白質であり、細胞の分化を抑制するシグナルを伝達する。このため、造血幹細胞を未分化なまま体外で増幅する技術の開発につながるのではないかと期待されている。本研究では、Notchのシグナルを用いて造血幹細胞の体外増幅の可能性を検討した。当初アデノウイルスを用いていたが、最近レトロウイルスベクターの改良により、幹細胞活性を持つ細胞への遺伝子導入が容易に行うことができるようになった。本研究ではレトロウイルスベクターを用い、Notchシグナル分子であるHES-1をマウス骨髄造血幹細胞分画(Lin-Scal+c-Kit+CD34-)に導入した。これを放射線照射同系マウスに移植することにより、造血幹細胞が試験管内およびレシピエントマウス個体内で、コントールに比べより維持されるか否かを検討した。HES-1導入造血幹細胞は試験管内で2日間、および移植されたマウス個体で3ヶ月、コントロール細胞に比較してより維持され、全ての系統の造血細胞を再構築した。HES-1シグナルは、造血幹細胞の体外増幅に有用と考えられた。今後は、NotchリガンドによりHES1の発現誘導が得られること、および、Notchリガンドを用いてHES1導入と類似の効果が得られることの検証を行う計画である。

造血干细胞的体外扩增是一项极其适用的技术，无论是对当前造血干细胞移植疗法的补充，还是未来基因疗法和人造血液的开发。开发这项技术的关键是如何在不分化的情况下扩增干细胞。 Notch是一种细胞膜受体型糖蛋白，可传递抑制细胞分化的信号。预计这将导致在体外以未分化状态扩增造血干细胞的技术的发展。在这项研究中，我们研究了利用Notch信号体外扩增造血干细胞的可能性。最初使用的是腺病毒，但最近逆转录病毒载体的改进使得将基因引入具有干细胞活性的细胞变得更容易。在本研究中，我们使用逆转录病毒载体将Notch信号分子HES-1引入小鼠骨髓造血干细胞组分（Lin-Scal+c-Kit+CD34-）中。通过将这些细胞移植到受辐射的同基因小鼠体内，我们研究了造血干细胞是否可以在体外和受体小鼠体内比对照小鼠更好地维持。与对照细胞相比，HES-1转导的造血干细胞在体外维持2天，在个体移植小鼠中维持3个月，并重建所有造血细胞谱系。 HES-1 信号被认为对于造血干细胞的体外扩增有用。未来，我们计划验证Notch配体可以诱导HES1表达，并且使用Notch配体可以获得与HES1引入类似的效果。