造血器腫瘍に対するシグナル伝達分子を用いた次世代造血幹細胞増幅法の開発

利用造血肿瘤信号分子开发下一代造血干细胞扩增方法

基本信息

批准号：
12217035
负责人：
高橋宗春
金额：
$ 3.14万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217035/
关键词：
造血幹細胞体外増幅アデノウイルス Notch AGM

项目摘要

造血幹細胞ヘシグナル伝達分子の遺伝子を導入・発現させて増幅を図る新しい方法の確立のため、本年度は導入するシグナル伝達物質の選択とそのシグナル伝達機構の主に血球分化抑制能からみた解析などを行った。1)導入するシグナル伝達物質の選択研究の目的に最適なシグナル伝達分子を選択するためのin vitroにおけるスクリーニング系として、1)ES細胞からの造血細胞の誘導、2)AGM領域由来の細胞からの造血細胞の誘導、の2系を確立した。これらを用いて様々なシグナル伝達分子を導入し、分化抑制能、増殖促進能などを比較した結果、ES細胞に活性化型Notch1を導入した場合、embryoid bodyから形成されるsecondary colonyは、再培養によりthird、fourth colonyを形成した。また、活性化型Notch1を発現するレトロウイルスを作成してAGM領域由来の細胞に導入すると混合コロニーが増加することが観察された。これらは活性化型Notch1の分化抑制シグナルが胎児造血でも成体造血でも有効であることを示している。2)Notchシグナルの造血分化抑制機構の解析Notchシグナルの造血系に対する分化抑制機構を転写因子の面から解析した。myeloid系、erythroid系転写因子について、正常細胞と活性化型Notch1発現細胞における分化刺激前後での遺伝子発現を比較した。その結果、GATA-2の発現が維持されていることから、Notch1による未熟性の維持が、GATA-2を介している可能性が示唆された。さらに、活性化型Notch1を発現した細胞にDominant negative GATAを発現させることにより、活性化型Notch1の分化抑制効果は消失した。以上より、Notchシグナルによる血液細胞の未熟性の維持には、GATA-2の発現の維持が必要であると考えられた。

为了建立一种新的方法，用于引入和表达造血干细胞的基因，将信号传播物质的选择以及主要在血细胞分化抑制中的信号传递机制进行分析。 1）选择要引入的信号。，已经建立了造血细胞的引导。由于引入各种信号传输分子并比较各种信号传输分子，并比较分化抑制分子，比例促销能力等。被形成。还观察到，当产生表达活化类型Notch1的逆转录病毒并将其引入来自AGM区域的细胞中时，混合菌落会增加。这些表明活化型Notch1的变体在胎儿造血或成人造血剂中有效。 2）分析了从转录因子作为转录因子作为转录因子的转录因子分析造血控制机制的造血机制的凹槽信号。在正常细胞和激活的Nonch1表达细胞分化刺激之前和之后，比较了髓样本和基于红系的转化因子的基因表达。结果，有人提出通过GATA-2保持GATA-2的表达，即通过Notch1的维持不成熟。此外，通过表达含有活化型Notch1的细胞中的显性负GATA，消除了激活型Notch1的分化抑制作用。从上面，人们认为通过Notch信号维持血细胞的不成熟需要维持GATA-2的表达。