線虫の休眠・延命の分子機構

线虫休眠和寿命延长的分子机制

基本信息

批准号：
12760227
负责人：
河野強
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760227/
关键词：
C.elegans insulin peptide diapause longevity fat metabolism

项目摘要

平成13年度においては,線虫の新たなインスリン様ペプチドの同定と発現パターンの解析ならぴに生理機能の解析に注力した。【新規インスリン様ペプチドの同定】既に同定済み応のCeinsulin-1,-2のアミノ酸配列をもとに,線虫のゲノムプロジェクト情報を検索し,さらに,RT-PCRによりcDNAを同定するごとにより新たなインスリン様ペプチドCeinsulin-3を同定した。本ペプチドはCeinsulin-1,-2と低い相同性を示した。【発現パターンの解析】各発育段階の線虫よりtotal RNAならぴにペプチド画分を調製し,RT-PCRならぴに抗Ceinsulin-3抗体を用いたウェスタン解析を行った。転写産物は幼虫期のみに検出されたが,ペプチドは幼虫期に加えて成虫期にも検出された。また,休眠期においては転写産物のみが検出された。遺伝子およびタンパク発現パターンが必ずしも一致しないことから,翻訳段階での制御機構が存在することが示唆された。【生理機能の解析】RNA干渉法によりCeinsulin-3の機能破壊株を作製し,表現型の解析を行った。機能破壊株では上皮細胞に著しい脂質の蓄積が認められた。これは受容体DAF-2の変異株め表現型の1つとよく一致した。また耐性幼虫形成および寿命には影響がなかったこのことから(1)ceinsulin-3はDAは-2リガンドの1つであること,(2)耐性幼卑形成のみを制御する他のインスリン様ペプチドが存在することが強く示唆された。

2001年，我们重点鉴定了秀丽隐杆线虫中新的胰岛素样肽，并分析了它们的表达模式及其生理功能。 [新型胰岛素样肽的鉴定] 根据已鉴定的Ceinsulin-1和-2的氨基酸序列，我们检索了秀丽隐杆线虫基因组计划信息，每次cDNA测序时都添加了新的胰岛素样肽。通过 RT-PCR 鉴定出胰岛素样肽 Ceinsulin-3。该肽与 Ceinsulin-1,-2 表现出较低的同源性。 [表达模式分析] 从各发育阶段的线虫中制备总RNA和肽级分，并使用RT-PCR和抗Ceinsulin-3抗体进行Western分析。仅在幼虫阶段检测到转录本，而在成虫阶段和幼虫阶段都检测到肽。此外，仅在休眠期间检测到转录本。基因和蛋白质表达模式不一定匹配的事实表明翻译阶段存在控制机制。 [生理功能分析] 利用RNA干扰方法创建功能破坏的Ceinsulin-3菌株，并分析其表型。在功能破坏的菌株中，在上皮细胞中观察到显着的脂质积累。这与受体 DAF-2 突变株的表型之一非常一致。此外，对抗性幼虫的形成或寿命没有影响。这表明(1)ceinsulin-3是DA-2配体之一，并且(2)其他胰岛素样肽仅控制抗性幼虫的形成。建议有。