トランスジェニックネマトーダを用いた生物検定法の確立

转基因线虫生物测定方法的建立

基本信息

批准号：
09760308
负责人：
河野強
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

線虫のゲノムプロジェクト情報を詳細に検索したところ、グルタミン酸トランスポーター遺伝子には、報告者が既にクローニングしたもの(Ceglut-I)以外に3つのサブタイプが存在することが示唆された。そこで、これらの遺伝子について、RACE法を用いてcDNAレベルでの塩基配列の確認を行った。3つのサブタイプ(それぞれCeglut-II、-III、-IVと命名)はそれぞれ502、532、575アミノ酸残基よりなり、Ceglut-Iとは43.8%、55.8%、50.8%の相同性を示した。また、ゲノム遺伝子の構造を比較したところ、Ceglut-Iが9個のエキソンからなるのに対し、Ceglut-II、-III、-IVはそれぞれ11、7、8個のエキソンからなり、イントロンの長さもまちまちであった。さらに、アフリカツメガエル卵母細胞を用いた発現系では、Ceglut-IIおよび-IVはCeglut-Iとほぼ同等のグルタミン酸トランスポート活性を示したが、Ceglut-IIIはグルタミン酸トランスポート活性を殆ど示さなかった。このことから、Ceglu-IIIはグルタミン酸トランスポータースーパーファミリーに属する中性アミノ酸のトランスポーターである可能性が示された。そこで、Ceglut-I-II、-IVに対応する2本鎖RNAを合成し線虫に導入すること(RNAi)により転写阻害を試みたところ、際立った表現型は認められなかった。これは、神経系特異的に発現する遺伝子を標的にした場合、RNAiによる転写阻害が不完全であることによると考えられる。現在、変異剤およびUV照射を併用した遺伝子破壊株の作製を試みている。

对昆虫基因组项目信息的详细搜索表明，谷氨酸中的转运蛋白基因除了已经克隆的那些（ceglut-i）以外的三个亚型。因此，使用种族方法证实了这些基因在cDNA水平上的基本序列。三个亚型（分别命名为Ceglut -II，-III，-IV）为502、532、575氨基酸残基，Ceglut -I的含量为43.8％，55.8％和50.8％。另外，在比较基因组基因的结构时，Ceglut -I由9个外显子组成，而Ceglut -II，-III和-IV分别为11、7和8个Exonson，以及内含子的长度是一个鸡小镇。此外，在使用非洲青蛙卵的表达系统中，Ceglut-II和-IV显示出与Ceglut-i的谷氨酸的运输，但Ceglut-III很少显示谷氨酸的运输活性。这表明Ceglu-III可能是属于谷氨酸转运蛋白超级家族的中性氨基酸的转运蛋白。因此，当合成与ceglut-i-II和-IV相对应的两个链RNA合成并引入昆虫（RNAI）时，不允许转录抑制作用。这可能是由于针对特异性表达的基因时RNAi的不完全转录抑制作用。目前，该公司正试图产生一种结合突变体和紫外线照射的基因破坏菌株。