高等植物におけるオルタナティブスプライシングによる情報発現の分子機構

高等植物选择性剪接信息表达的分子机制

• 批准号: 12740445
• 负责人: 真野 昌二
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12740445/
• 关键词: オルタナティブスプライシング; SRタンパク質; 光制御; 細部内局在性; カボチャ; シロイヌナズナ; 形質転換植物; ペルオキシソーム; 細胞内局在性; オルタナティブスプライシング; SRタンパク質; 光制御; 細部内局在性; カボチャ; シロイヌナズナ; 形質転換植物; ペルオキシソーム; 細胞内局在性

昨年度の解析より、カボチャの2種類のSRタンパク質とGreen fluorescent portein(GFP)との融合タンパク質を発現している形質転換シロイヌナズナは、非形質転換体に比べ、葉が不均一に出る、葉の形がおかしくなる、茎が伸びるのが早いといった形態異常を示すことから、過剰発現しているSRタンパク質によって、正常なスプライシングが乱されていることに起因していると考えられた。LSD、U1-70K、atSRp30、FCA、SF1タンパク質は、シロイヌナズナはオルタナティブスプライシングにより複数のバリアントとして存在することが報告されている。これらのスプライシングパターンを、ノーザンブロットおよびRT-PCRにより、形質転換体と非形質転換体で比較したところ顕著な差は見られなかった。現在、クローン化したSRタンパク質が、どのようなRNA配列を認識して結合するかを、SELEX解析で明らかにするために準備を始めている。形質転換体の各組織の解析から、このSRタンパク質は根端組織では核だけでなく細胞礎質にも局在していることが明らかとなり、培養細胞の系から得られている細胞周期に応じて細胞内局在性を変化させるという結果と一致していることから、根端組織のような分裂活性の高い細胞において、局在性を変化させていることが示唆された。今後は、地上部の分裂組織における細胞内局在性の解析を進めていく予定である。また、非形質転換体に比べ、形質転換体は茎が細い表現系も示すことから、横軸方向における細胞数の低下、あるいは細胞伸長の現象が考えられる。この点においても、走査型電子顕微鏡、透過型電子顕微鏡を用いて解析を行っていく。

根据去年的一项分析，转化的拟南芥在两种类型的南瓜SR蛋白和绿色荧光港口（GFP）之间表达了融合蛋白，表现出形态异常，例如，与非转移的人相比，与非转化的蛋白质相比，诸如异质叶形，异质叶形和更快的茎相比，诸如叶状形状和更快的茎相比。据报道，通过替代剪接，LSD，U1-70K，ATSRP30，FCA和SF1蛋白作为拟南芥中的多种变体存在。通过Northern印迹和RT-PCR比较了转化体和非转化物之间的这些剪接模式，没有发现显着差异。当前，正在制备以确定克隆SR蛋白的RNA序列通过SELEX分析识别和结合的。对转化剂的每个组织的分析表明，该SR蛋白不仅在细胞核中局部，而且在细胞基础中也定位，并且与根据从培养的细胞系统中获得的细胞周期改变亚细胞定位的结果一致，这表明它会在细胞中改变具有高分裂活性（例如根组织）的细胞中的定位。将来，我们计划继续分析外星生组织中的亚细胞定位。此外，由于转化子表现出比非转化剂的细长茎，因此转化物也表现出茎的表型，因此可能在水平轴方向或细胞延伸现象的细胞数量。在这方面，将使用扫描电子显微镜和透射电子显微镜进行分析。