ヨードシンポーターに対する自己抗体と甲状腺機能低下症に関する研究

碘转运体自身抗体与甲状腺功能减退症的研究

• 批准号: 11771508
• 负责人: 日高 洋
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771508/
• 关键词: ヨードシンポーター; 自己免疫性甲状腺炎; 甲状腺機能低下症; フローサイトメーター; ELISA

ヨードシンポーター(NIS)に対する自己抗体を有する自己免疫性甲状腺炎患者では、ヨードの細胞内への取り込み障害が起こり、甲状腺機能低下症になるのではないかと私たちは推定しており、それを証明することが本研究の目的である。平成11年度にはNISを細胞表面に高密度で発現しているHEK細胞を得て、この細胞と自己免疫性甲状腺炎患者血清を反応させ、さらにFITC標識抗ヒトIgG抗体を加え、フローサイトメーターで調べたが、NISを発現していないHEK細胞にも患者血清が結合し、このままでは自己抗体を特異的に検出することができないことが明らかになった。そこで、平成12年度にはヒトNIS-C末端の15アミノ酸に対するウサギ血清よりIgGを精製し、これをELISAプレートに結合させたのち洗浄し、昨年度の研究で得たヒトNISを高密度に発現させたHEK細胞を可溶化し、抗ヒトNISウサギIgGに結合させたのち洗浄し、抗NIS抗体の有無を調べたいヒト血清を加え洗浄し、アルカリフォスファターゼ(AP)を付けた抗ヒトIgG抗体を加え洗浄し、最後にAP基質を加え、その発色の程度により自己抗体の有無を判定した。自己免疫性甲状腺炎患者血清が抗ヒトNISウサギIgGに非特異的に結合してしまうため、ヒトNISに対する自己抗体を特異的に検出することができないことが明らかになった。以上の結果より、現時点でNISのような膜蛋白に対する自己抗体を調べるには、最近報告されだしたin vitro transcription/translationで合成した標識蛋白を用いたradioligand assayが適当な測定法ではないかと推定される。本研究で作成した細胞は自己抗体を測定するためには利用できなかったが、今後NISの自己免疫性甲状腺炎における役割を調べる上で利用していく予定である。

我们估计，在自身免疫性甲状腺炎的患者中，抗碘分类蛋白（NIS）的自身抗体，碘对细胞的摄取受损，导致甲状腺功能减退症，这项研究的目的是证明这一点。在1999年，获得了在细胞表面高密度表达NIS的HEK细胞，并与这些细胞自身免疫性甲状腺炎的血清反应，并加入FITC标记的抗人IgG抗体，并使用流式细胞仪检查患者的血清。有人发现，患者的血清还与无法表达NIS的HEK细胞结合，并且如果他们保持这种状态，则无法明确检测自身抗体。 Therefore, in 2000, IgG was purified from rabbit serum for 15 amino acids at the human NIS-C terminal, bound to an ELISA plate, and then washed, HEK cells with high density of human NIS expressed in a study last year were solubilized, bound to anti-human NIS rabbit IgG, and then washed, human serum that was intended to check for the presence or absence of anti-NIS antibodies was added,添加了碱IgG抗体与碱性磷酸酶（AP）的抗体，最后添加AP底物，并根据颜色发展程度确定自身抗体的存在或不存在。据研究表明，针对人NIS的自身抗体无法特异性检测到，因为自身免疫性甲状腺炎患者的血清与抗人NIS兔IgG非特异性结合。基于上述结果，据估计，在当前研究对膜蛋白（例如NIS）的自身抗体，使用最近报道的体外转录/翻译合成的标记蛋白质的放射性物体测定是一种适当的方法。这项研究中创建的细胞无法测量自身抗体，但我们计划将来使用它们来研究NIS在自身免疫性甲状腺炎中的作用。

项目成果

Aya Yagoro: "Pospartum onset of acute heart failure possibly due to postpartum autoimmune myocarditis: a report of the three cases"Jourmal of Internal Medicine. 245・2. 199-203 (1999)

Aya Yagoro：“可能由产后自身免疫性心肌炎引起的产后急性心力衰竭：三例报告”内科杂志 245・2（1999）。

Masahiro Kimura: "Enzyme immunoassay for autoantibodies to human liver-type arginase and its clinical application."Clinial Chemistry. 46・1. 112-117 (2000)

Masahiro Kimura：“人肝型精氨酸酶自身抗体的酶免疫测定及其临床应用”。《临床化学》46・1（2000）。

Yuki Shimaoka: "Changes in cytokine production during and after normal preganacy"American Journal of Reproductive Immunology. (発売予定). (2000)

Yuki Shimaoka：“正常怀孕期间和之后细胞因子产生的变化”美国生殖免疫学杂志（2000 年）。

Yukihiko Watanabe: "Polyethylene glycol increases the detection of anti-thyrotropin (TSH) receptor antibodies by a radioreceptor assay"Clinical Chemistry. 45・3. 407-409 (1999)

Yukihiko Watanabe：“聚乙二醇通过放射受体测定增加抗促甲状腺素（TSH）受体抗体的检测”《临床化学》45·3（1999）。

Yuki Shimaoka: "Influence of breast-feeding on the production of cytokines."American Journal of Reproductive Immunology. (発表予定). (2001)

Yuki Shimaoka：“母乳喂养对细胞因子产生的影响”。《美国生殖免疫学杂志》（即将出版）。