象牙質接着におけるコラーゲン-ポリアクリル酸複合体形成とその構造解析

牙本质粘附中胶原蛋白-聚丙烯酸复合物的形成及其结构分析

基本信息

批准号：
11771227
负责人：
根津尚史
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシ皮膚コラーゲンのコハク酸修飾前年度と同様に、ウシ皮膚コラーゲン(CSC)に無水コハク酸を作用させて、CSCの塩基性アミノ酸残基側鎖にコハク酸を導入し、酸性から中性の広いpH範囲で可溶なコハク酸化CSC(SCSC)を調製した。円二色性(CD)測定三重らせん規則構造を持つ未変性状態のコラーゲンはCDスペクトルにおいて220nmに正、194nmに負のバンドを示す。pH3においてコラーゲン濃度一定下(C(SCSC)=0.1mM)でPAA濃度(C(PAA))を増加すると、混合比R(≡C(PAA)/C(SCSC))=0.65付近でスペクトル強度が減少し沈澱が生じることが前年度の実験より明らかになっているが、さらに過剰のPAAを添加すると再溶解が起こり、未変性コラーゲンと同じスペクトルが現れた。このことから、再溶解後もSCSCの高次構造は三重らせんであることがうかがわれた。スペクトルがほとんど消失するR=0.65付近でのSCSCの高次構造と、SCSC/PAA複合体の再溶解の機構についての検討が今後の課題に残された。ゲル濾過クロマトグラフィー(GPC)前年度のGPCの予備実験ではSCSCは紫外吸収(UV)、示差屈折率(RI)のいずれの検出器でもモニターできることが確かめられた。これに対して固有の発色団がないPAAはRIでの検出が期待されたが、実際にはほとんど検出されなかった。また、CD測定の条件ではSCSC/PAA複合体が析出してしまい、析出のない低濃度条件はGPCシステムの検出限界以下となるため、この系はこのままではGPCに適さない。両高分子間の相互作用に影響を与えない程度に、大きな吸光係数を持つ発色団をいずれかの高分子に導入するなどの工夫によって、低濃度での分析が可能になると考えられ、この方法による問題解決が今後の課題となった。

与上一年的肥大皮肤胶原蛋白修饰一样，将琥珀酸酸酐应用于牛皮肤胶原蛋白（CSC），以将琥珀酸引入CSCS碱性氨基酸基本氨基酸残基的侧链，并在从酸到中酸的pH范围内制备可溶性琥珀酸氧化的CSC（SCSC）。在本地状态下的圆二色性（CD）测量胶原蛋白具有三重螺旋有序结构的结构在220 nm处表现为正带，在CD光谱中的194 nm处表现为负带。上一年的实验表明，当PAA浓度（C（PAA））在pH 3时在恒定胶原蛋白浓度（C（SCSC）= 0.1mm）下增加时，光谱强度在0.65左右降低并且会发生降水。但是，当添加过量的PAA时，会发生重新分辨，从而产生与天然胶原蛋白相同的光谱。这表明即使在重新溶解后，SCSC的高阶结构也是三重螺旋。 SCSC在r = 0.65左右的高阶结构的研究几乎完全消失了，而SCSC/PAA复合物的重新分解机理仍然是未来挑战的主题。上一年与GPC进行的凝胶过滤器色谱（GPC）初步实验证实，可以使用紫外线吸收（UV）或差异折射率（RI）检测器来监测SCSC。相比之下，预计没有RI检测到没有内在发色团的PAA，但实际上几乎没有被检测到它们。此外，在CD测量的条件下，SCSC/PAA复合材料沉淀和没有沉淀的低浓度条件低于GPC系统的检测极限，因此如果保持原状，该系统不适合GPC。人们认为，通过发明对其中一种聚合物的灭绝系数的使用，通过引入具有较大灭绝系数的发色团，可以在低浓度下进行分析，以至于它们不会影响两种聚合物之间的相互作用，并且使用这种方法来解决该方法的相互作用已成为未来的挑战。