強皮症病変皮膚の線維芽細胞における自己抗原の修飾の解析

硬皮病皮损皮肤成纤维细胞自身抗原修饰分析

• 批准号: 11770248
• 负责人: 桑名 正隆
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770248/
• 关键词: 全身性硬化症(強皮症); 自己免疫疾患; 線維芽細胞; 自己反応性T細胞; トポイソメラーゼ; 自己抗体; 翻訳後修飾

全身性硬化症(強皮症)患者ではトポイソメラーゼI(トポI)やRNAポリメラーゼI/IIIなど生命活動に必須な酵素に対する自己抗体が産生される。これら自己抗体は強皮症の発症を誘導しないことから、その産生は強皮症の病態に関連する付随的な現象と理解されている。これまでの研究成果から、抗トポI抗体産生は正常のT細胞レパトワに存在するトポIを認識する自己反応性CD4^+T細胞の活性化により誘導されることが明らかにされている。これらトポI反応性CD4^+T細胞は生理的な環境では発現されない抗原ペプチド(crypticペプチド)を認識することから、強皮症患者のいずれかの部位でトポIのcrypticペプチドが発現されている可能性が高い。そこで、申請者はトポI由来のcrypticペプチドの発現部位として、強皮症の病態の中心である線維芽細胞を想定した。その点を検証するため、強皮症患者の病変/健常皮膚または健常人皮膚より採取した線維芽細胞におけるトポIの過剰発現や分子修飾の可能性について検討し、以下の結果が得られた。1.強皮症病変部位の線維芽細胞におけるトポIのmRNA発現量は、強皮症患者の健常皮膚や健常人皮膚の線維芽細胞に比べて2-8倍上昇していた。2.免疫ブロット法による検討では、強皮症、健常人線維芽細胞でトポIの蛋白分子量に差はなかった。3.免疫沈降法による解析の結果、強皮症病変部位の線維芽細胞ではトポI分子が複数の蛋白と複合体を形成していることが明らかとなった。これらのトポI結合蛋白のうち少なくとも2つは強皮症患者健常皮膚や健常人皮膚の線維芽細胞ではトポIとともに免疫沈降されなかった。以上の成績より、強皮症病変部位の線維芽細胞ではトポIの発現が亢進し、他の蛋白(転写因子など)と結合することで過剰な細胞間マトリックスの産生や自己抗体産生にかかわっている可能性が示された。

系统性硬化症（硬皮病）患者会产生针对生命必需酶的自身抗体，例如拓扑异构酶 I (topo I) 和 RNA 聚合酶 I/III。由于这些自身抗体不会诱发硬皮病的发作，因此它们的产生被认为是与硬皮病病理学相关的偶然现象。先前的研究结果表明，抗拓扑 I 抗体的产生是由自身反应性 CD4^+ T 细胞的激活诱导的，这些细胞识别正常 T 细胞库中存在的拓扑 I。这些topo I反应性CD4^+ T细胞识别在生理环境中不表达的抗原肽（隐性肽），表明硬皮病患者的某些位点很可能表达topo I隐性肽。因此，申请人设想将硬皮病病理学核心的成纤维细胞作为拓扑I衍生的隐性肽的表达位点。为了验证这一点，我们研究了从硬皮病患者的病变/健康皮肤或健康人皮肤收集的成纤维细胞中topo I过度表达和分子修饰的可能性，并获得了以下结果。 1.硬皮病病灶部位成纤维细胞中topo I mRNA表达水平比硬皮病患者健康皮肤成纤维细胞和健康人皮肤成纤维细胞高2-8倍。 2.免疫印迹分析显示硬皮病和健康成纤维细胞中topo I蛋白分子量无差异。 3.免疫沉淀分析显示，硬皮病病变部位的成纤维细胞中，拓扑异构酶I分子与多种蛋白形成复合物。这些拓扑异构酶 I 结合蛋白中的至少两种不与硬皮病患者健康皮肤或健康人皮肤的成纤维细胞中的拓扑异构酶 I 共免疫沉淀。由以上结果可知，在硬皮病病变部位的成纤维细胞中，拓扑I的表达增加，并且通过与其他蛋白质(转录因子等)结合，参与细胞间基质的过度生成和自身抗体的生成。是一种可能性

项目成果

Kuwana M, et al.: "Longitudinal analysis of autoantibody response to topoisomerase I in systemic sclerosis"Arthritis Rheum. 43・5. 1074-1084 (2000)

Kuwana M 等人：“系统性硬化症中拓扑异构酶 I 自身抗体反应的纵向分析”Arthritis Rheum 1074-1084 (2000)。

桑名正隆: "自己免疫疾患における自己抗体産生機序の解析"日本皮膚科学会雑誌. 109・12. 1917-1918 (1999)

Masataka Kuwana：“自身免疫性疾病中自身抗体产生机制的分析”日本皮肤病学会杂志1917-1918（1999）。

Kuwana M,et al.: "Association of HLA class II genes with autoantibody profiles,but not with desease susceptibility in Japanese patients with systemic sclerosis"Internal Medicine. 38・4. 336-344 (1999)

Kuwana M 等人：“HLA II 类基因与自身抗体谱的关联，但与日本系统性硬化症患者的疾病易感性无关”，Internal Medicine 38・4 (1999)。

竹原和彦,桑名正隆 他: "膠原病診療-専門医によるベストアドバイス"診断と治療社. 216 (2000)

Kazuhiko Takehara、Masataka Kuwana 等人：“胶原蛋白疾病治疗 - 专家的最佳建议”诊断与治疗出版 216 (2000)。

Ogawa Y,Kuwana M, et al.: "A significant role of stromal fibroblasts in rapidly progressive dry eye in patients with chronic GVHD"Invest Ophthalmol Vis Sci. 42・1. 111-119 (2001)

Okawa Y、Kuwana M 等人：“基质成纤维细胞在慢性 GVHD 患者快速进展性干眼中的重要作用”Invest Olookingmol Vis Sci 42・1 (2001)。