近接場プローブ顕微鏡を用いた単一DNA分子のセンシング

使用近场探针显微镜检测单个 DNA 分子

基本信息

批准号：
11750682
负责人：
居城邦治
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、DNA分子1個のゲノムマッピングを、近接場プローブ顕微鏡を用いた蛍光観察で行うことにある。そのためには、蛍光標識された特異的オリゴヌクレオチドがハイブリッドした単一DNA分子を基板上に引き伸ばして固定化する新手法の開発、また超高感度での蛍光観察のための近接場プローブ顕微鏡へのフォトンカウンティング技術の応用が必要不可欠である。昨年度は、固体基板に引き伸ばして固定化されたDNA1分子に結合した蛍光標識プローブを調べるために、新たにフォトンカウンティングを装備した超高感度近接場プローブ顕微鏡を用いて、引き伸ばされたDNA1分子の蛍光像とDNA自身のトポグラフ像(表面の凹凸)を同時に測定した。本年度はこの手法を用いて単一DNA分子に結合した単一蛍光分子の蛍光像の測定を試みた。具体的には1)気水界面にて脂質-DNA複合体の単分子膜を形成させ、これをガラス基板に垂直引き上げ法により移し取りDNA試料を作製した。超高感度近接場プローブ顕微鏡により単一DNA分子の長さとDNAの分子量との関係を調べ、DNA一分子が完全に引き延ばされる条件を調べた。(居城邦治ら,高分子加工,50,33(2001))2)無蛍光標識二重らせんDNAを引き伸ばしてガラス基板に固定化し、FISH法を行い超高感度近接場プローブ顕微鏡で蛍光プローブの空間的位置を一分子レベルすなわちナノメーターレベルでの計測を試みた。しかし、現有のフォトカウンティングシステムでも単一蛍光分子からの蛍光信号を検出することは困難であった。今後は近接場プローブ顕微鏡の光検出部をより高感度なAPDに交換して引き続き実験を行う予定である。

这项研究的目的是使用近乎可行的探针显微镜通过荧光观察对一个DNA分子进行基因组映射。为此，一种新的方法，一种在基板上开发具有荧光寡核苷酸并固定的新的DNA分子，以及对超高 - 近距离敏感性的近战观察，近高 - 敏感性，接近 - 近距离探针显微镜光子计数技术的应用是必不可少的。去年，为了检查荧光探针探针，该荧光探针探针被延伸到固体底物中并与固定的DNA1分子结合，新的超高 - 高敏感性接闭位置探针探针显微镜，配备了光子计数，扩展的DNA1分子荧光荧光荧光。同时测量荧光。今年，我们试图测量使用此方法与单个DNA分子结合的单个荧光分子的荧光图像。具体而言，1）在Acare水域上形成了脂质-DNA复合物的单塑料膜，并将其转移到玻璃基板上以创建DNA样品。 Ultra -High-敏感的关闭 - 探针显微镜检查了单个DNA分子的长度与DNA的分子量之间的关系，并检查了DNA One -Minute分子完全扩展的条件。（Kuniharu Ijo等其他，聚合物加工，50,33（2001）2）2）2）双荧光标志DNA被拉伸，固定在玻璃板上，进行鱼类方法，超高敏感的关闭位置探针显微镜，荧光探针，荧光探头空间。我们试图在一个分子水平或纳米水平上测量目标位置。但是，很难通过当前的照片计数系统检测到来自单个荧光分子的荧光信号。将来，我们计划通过更高灵敏度APD替换近距离探针显微镜的光检查部分来继续实验。