水晶発振子と高感度蛍光顕微鏡を組み合わせた単分子DNA電気泳動法の研究

晶体振荡器与高灵敏荧光显微镜组合的单分子DNA电泳研究

• 批准号: 07855112
• 负责人: 居城 邦治
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07855112/
• 关键词: 水晶発振子; DNA; 蛍光顕微鏡; 1分子観察; 電気泳動; 単分子膜

本研究では、DNAの分子量を測定する方法として、新たに水晶発振子と高感度蛍光顕微鏡を組み合わせたDNA1分子の電気泳動の超微量直接観察法を開発することを目的とした。今年度の実験では、高感度蛍光顕微鏡によるDNAの超微量直接観察法の確立と水晶発振子への電気泳動用電極の加工法の検討を行った。1.カチオン性界面に固定化されたDNA分子の電気泳動を確認するために、ガラスを基板とした、くし形電極上に、カチオン性脂質ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロマイドの気水界面単分子膜1層をラングミュアー-ブロジェット法により累積した。2.1kbpから100kbpのDNAフラグメントの希薄水溶液から、修飾くし形電極上に静電相互作用によりDNAを固定化した。3.固定化しDNA孤立分子を、蛍光色素YOYOで染色して、画像処理装置を組み合わせた高感度蛍光顕微鏡で観察した。さらに原子間力顕微鏡による観察も行った。4.くし形電極に数ボルトから数十ボルトの静電圧を印可して、DNA分子の陽極への移動を観察した。水溶液の塩強度およびpHを種々変化させてもDNA分子の移動は観察されなかった。おそらく、単分子膜表面の4級アンモニウムとDNAのリン酸の結合が強すぎるためと考察される。そのためDNAの界面への結合を弱くする、例えば、単分子膜に非イオン性脂質を添加してカチオン密度を下げる、もしくは4級アンモニウム塩脂質の代わりに1級アミン脂質を使用する、ことが改善策として期待される。5.水晶発振子上に、電気泳動用電極を金のスパッタリング法により作製を試みた。しかし、このために入手した水晶発振子基板の直径が、1.5cmと小さかったために電気泳動用電極の作製は困難であった。スパッタリング法による電極作製には直径は3cm以上必要であることがわかった。

在这项研究中，测量DNA分子量的目的是开发一种新的DNA1分子电子游泳分子，其中开发了晶体振荡器和高敏感性荧光显微镜的新组合。在今年的实验中，我们通过高敏感性荧光显微镜建立了一种DNA直接观察方法，并检查了晶体振荡上电动游泳电极的处理方法。 1。为了检查固定在阳离子界面上的DNA分子的电子游泳，使用玻璃作为玻璃堆积的底层是地理 - 脂质高emighter的脂质脂质地烷基溴化物溴化物溴溴的单层。 Muret-Bloget法。将DNA从2.1kbp的光水溶液固定到100kbp DNA片段，再到静电相互作用的修饰电极。 3。用荧光色素yoyo固定和染色DNA分离的分子，并用高敏感性荧光显微镜观察，结合了图像处理设备。另外，通过间歇性显微镜进行观察。 4。在电极组合的情况下，施加了几十个螺栓的许多螺栓，并观察到DNA分子的运动。即使以各种方式改变了水溶液和pH的盐强度，也没有观察到DNA分子的运动。也许可以认为，四年级铵在单分子膜表面的结合和DNA的磷酸太强。因此，我们将改善DNA与界面的结合，例如，在单个边缘膜中添加非离子脂质以降低阳离子密度，或使用第一级 - 级胺脂质而不是四年级的铵盐。 5。在晶体振荡器上，我们试图通过金溅射法创建电气游泳电极。然而。事实证明，通过溅射方法生产电极的直径为3厘米或更多。