核酸-脂質複合体への蛍光色素取り込みを利用した相補的塩基対形成の高感度検出

使用荧光染料掺入核酸-脂质复合物来高灵敏地检测互补碱基配对

基本信息

批准号：
06854039
负责人：
居城邦治
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、水面上にジアルキル型脂質と長鎖アルキル基を持つ一本鎖DNAからなる核酸-脂質複合体を作製すること、および、水相に添加した相補的なDNAとの塩基対形成を、二重鎖DNAに特異的にインターカレートされる色素からの蛍光発光を利用することで高感度に検出しようとすることにある。1.核酸-脂質複合体として、一本鎖DNAの最小単位の一つである塩基シトシンに長鎖アルキル基を導入したオクタデシルシトシンを新規に合成した。2.水面上でのインターカレーションを観察するために、色素インターカレーターであるアクリジンオレンジに長鎖アルキル基を導入したオクタデシルアクリジンオレンジを新規に合成した。3.アデノシン、シチジン、ウリジン、グアノシンをそれぞれ添加した水相上にオクタデシルシトシンの単分子膜を作製して、表面圧-面積曲線を測定した結果、水相にグアノシンが存在するときのみ安定な単分子膜の形成が確認できたことから、水面上での核酸-脂質複合体のシトシンと水相中のグアノシンとの塩基対形成が示唆された。4.核酸-脂質複合体にオクタデシルアクリジンオレンジを混合させ、水面上での蛍光顕微鏡観察を行ったところ、グアノシン水溶液上では緑色発光が認められ、水面上で形成された塩基対間へのアクリジンオレンジのインターカレーションが確認された。以上の結果より、インターカレーションによる蛍光発光を利用した水面上での塩基対形成の検出は可能であることがわかった。

本研究的目的是创建一种由二烷基脂质和水表面带有长链烷基的单链 DNA 组成的核酸-脂质复合物，并将其与添加到水相中的互补 DNA 进行碱基配对目的是利用特异性嵌入 DNA 的染料发出的荧光，以高灵敏度检测双链 DNA 的形成。 1.十八烷基胞嘧啶是通过在碱基胞嘧啶中引入长链烷基而新合成的核酸-脂质复合物，胞嘧啶是单链DNA的最小单位之一。 2.为了观察水表面的嵌入情况，我们新合成了十八烷基吖啶橙，它是一种染料嵌入剂吖啶橙，引入了长链烷基。 3.在加入腺苷、胞苷、尿苷和鸟苷的水相上制备单层十八烷基胞嘧啶，并测量表面压力-面积曲线，证实了分子膜的形成，表明胞嘧啶之间存在碱基配对。水表面的核酸-脂质复合物和水相的鸟苷。 4、将十八烷基吖啶橙与核酸-脂质复合物混合，在水面上用荧光显微镜观察，鸟苷水溶液上观察到绿光，在水面形成的碱基对之间观察到吖啶橙证实了插层。由以上结果可知，可以利用插层引起的荧光发光来检测水面上的碱基对的形成。