IL-1による破骨細胞のNF-κBの活性化に伴う骨吸収機構の解析

IL-1激活破骨细胞NF-κB相关骨吸收机制分析

基本信息

批准号：
09771546
负责人：
自見英治郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究には、マウス骨芽細胞と骨髄細胞の共存培養よりエキスタチンを用いて得られる単核および2核の前破骨細胞を実験に用いた。1. 前骨破骨細胞のIL-1受容体の解析エキスタチン処理によって得られた前破骨細胞の純度は、95%以上であり、そのうちの85%が単核、および2核の細胞であった。IL-1受容体の発現をIL-1 I型受容体に対する抗体を用いて免疫染色を行ったところ、前破骨細胞がIL-1 I型受容体を発現していることを確認した。2. IL-1による前破骨細胞の融合純化した前破骨細胞にIL-1およびIL-1同様、破骨細胞の延命効果を有するマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)を添加すると、8時間後にはほとんどの細胞が多核化した。一方、IL-1およびM-CSFを添加しない場合、8時間後には大部分の細胞が死滅した。IL-1およびM-CSFによる前破骨細胞の多核化はIL-1受容体アンタゴニスト、およびM-CSF受容体(c-Fms)中和抗体によってそれぞれ抑制された。3. IL-1による骨吸収能の発現誘導の解析IL-1によって多核化した細胞をファロイジン染色を行うとアクチンリングを形成したのに対して、M-CSFによって多核化した細胞はアクチンリングを形成しなかった。このアクチンリングの形成は骨吸収能と密接な関係があることを我々はすでに報告している。そこで純化した前破骨細胞を象牙片上に蒔き、IL-1およびM-CSFを添加して24時間後に形成された吸収窩の面積を計測したところ、IL-1を添加した場合のみ、吸収窩が形成された。また成熟破骨細胞を用いた場合においても、同様の実験結果が得られた。以上の結果から、前破骨細胞はIL-1 I型受容体を発現し、IL-1を処理することによって延命、多核化、さらに骨吸収能を発現することが明かとなった。一方、M-CSFによっても前破骨細胞の延命、多核化を誘導することができるが、骨吸収能を発現することは出来なかった。このことから破骨細胞の骨吸収能の発現が単に延命による2次的作用ではないことが示唆された。IL-1による骨吸収能の発現メカニズムを現在検討中である。

在这项研究中，使用了通过使用echistatin将小鼠成骨细胞和骨髓细胞共培养而获得的单核和双核前破骨细胞。 1.前破骨细胞中IL-1受体的分析针抑素处理得到的前破骨细胞纯度在95％以上，其中85％为单核和双核细胞Ta。使用针对 IL-1 I 型受体的抗体对 IL-1 受体表达进行免疫染色，证实前破骨细胞表达 IL-1 I 型受体。 2.前破骨细胞与IL-1的融合一段时间后，向纯化的前破骨细胞中添加IL-1和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，其对破骨细胞存活的影响与IL-1相同。，大多数细胞变成多核的。另一方面，当不添加IL-1和M-CSF时，大多数细胞在8小时后死亡。 IL-1 和 M-CSF 诱导的前破骨细胞的多核作用分别被 IL-1 受体拮抗剂和 M-CSF 受体 (c-Fms) 中和抗体抑制。 3.IL-1诱导骨吸收能力的分析当IL-1多核细胞用鬼笔环肽染色时，它们形成肌动蛋白环，而M-CSF多核细胞不形成肌动蛋白环。我们已经报道过，这种肌动蛋白环的形成与骨吸收能力密切相关。将纯化的前破骨细胞接种在牙本质片上，添加IL-1和M-CSF，并测量24小时后形成的吸收空洞的面积。当使用成熟的破骨细胞时也获得了类似的实验结果。上述结果表明，前破骨细胞表达IL-1 I型受体，并且用IL-1治疗可延长寿命，变得多核，并表现出骨吸收能力。另一方面，尽管M-CSF可以延长前破骨细胞的寿命并诱导多核，但它们无法表达骨吸收能力。这表明破骨细胞骨吸收能力的表达不仅仅是延长寿命的次要作用。我们目前正在研究IL-1诱导骨吸收能力的机制。