心筋虚血、心肥大におけるアポトーシス誘導とその役割

细胞凋亡诱导及其在心肌缺血和心肌肥厚中的作用

• 批准号: 09770507
• 负责人: 鈴木 史子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770507/
• 关键词: アポトーシス; 心肥大; 虚血; 虚血再潅流; ラット; bcl-2; DNAラダー; PCR

「目 的」近年、プログラム細胞死(アポトーシス)が様々な病態と関連することが明らかになりつつある。心筋細胞においても心筋炎などによりアポトーシスが生じることが報告され、各種心臓疾患の病態進行との関連が注目されている。当該研究費により肥大心および虚血、虚血再灌流心でアポトーシスが出現するかどうか検討を行った。「方 法」圧負荷肥大心モデル(Goldblatt Rat)を作成。血圧の上昇を認めたラット(1-7週)より心臓を摘出した。またランゲンドルフ摘出灌流心を用い、実験的に冠血流量を10%に減少させ虚血(30分、60分)および虚血再灌流(30分虚血-30分再灌流)を起こした後、心臓を摘出した。摘出した心臓より、組織標本およびDNA,RNAの抽出を行った。「結 果」肥大心モデルジゴキシグニン標識によるDNA断片化を検出した(Apop-Tag,Bio-Rad)。術後4週以降にアポトーシス細胞の出現を認めた。同一心臓より抽出したDNA標本よりDNAラダーの検出を行ったが著明なDNAの断片化は認められなかった。またRNA標本よりアポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2遺伝子発現をPCR法を用い検討した。術後4週以降の心筋、特にアポトーシスが多く認められたものでbcl-2遺伝子の発現が減少していた。これら心臓では線維化の亢進が認められた。虚血・虚血再灌流モデル30分群、60分群、虚血再灌流群いずれにおいても著明なアポトーシス細胞の出現は確認できなかった。bcl-2遺伝子発現のレベルも各群間で大きな差はなかった。さらに心筋細胞体積の変化および核像の変化も同時に検討した。虚血再灌流群の心で心筋細胞体積の膨大、核像の若干の変化を認めた。「考 察」肥大心においてアポトーシス細胞の出現を認め、心筋リモデリングにアポトーシスが関与することが考えられた。この現象と心筋線維化の亢進の関与も考えられた。一方、虚血・虚血再灌流によるアポトーシスの出現は認められなかった。しかし虚血によりアポトーシスが生じるという報告もなされており、より強い虚血(total ischemia)や再灌流時間の延長などを行い再度検討する必要があるものと考える。

近年来，“目标”已经很明显，程序性细胞死亡（凋亡）与多种病理状况有关。据报道，由于心肌炎和其他因素，凋亡发生在心肌细胞中，并且其与各种心脏病的发展的关联引起了人们的关注。我们研究了凋亡是否发生在肥厚的心脏，缺血和缺血 - 重新灌注心脏中，但以研究为代价。 “方法”创建了压力负荷肥大心脏模型（Goldblatt Rat）。从血压升高的大鼠（第1-7周）中去除心脏。此外，使用Langendorff口气的灌注心脏，将冠状动脉流动降低至10％，缺血（30分钟，60分钟）和局部缺血 - 再灌注（30分钟 - 缺血-30分钟再灌注），然后将其去除。从提取的心脏中提取组织样品，DNA和RNA。检测到二高辛蛋白标记的“结果” DNA片段化（apop-tag，biio-rad）。手术4周后观察到凋亡细胞的出现。从从同一心脏提取的DNA试样中检测到DNA梯，但未观察到明显的DNA碎片。此外，使用RNA标本中的PCR方法检查了Bcl-2基因的表达是一种凋亡抑制基因。手术后4周后观察到心肌，尤其是凋亡，并降低了Bcl-2基因的表达。在这些心脏中观察到纤维化增加。在30分钟组的缺血/缺血 - 再灌注模型中，没有观察到明显的凋亡细胞，60分钟组或缺血 - 再灌注组。两组之间的Bcl-2基因表达水平也没有显着差异。此外，还同时检查了心肌细胞体积和核图像的变化。在缺血 - 再灌注组的心脏中观察到了大量的心肌细胞和核图像的略有变化。 “考虑”在肥厚的心脏中观察到凋亡细胞的出现，并认为凋亡参与心肌重塑。还考虑了这种现象以及心肌纤维化增加的参与。另一方面，由于缺血或缺血 - 再灌注，未观察到凋亡。但是，有报道称凋亡是由于缺血引起的，人们认为有必要通过进一步加强缺血并延长再灌注时间来重新检查结果。