受容体の活性化により惹起される細胞内Ca2+動態と情報伝達系の分子メカニズム解明

阐明受体激活诱导的细胞内Ca2+动力学和信息转导系统的分子机制

• 批准号: 21590272
• 负责人: 鈴木 史子
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21590272/
• 关键词: スナピン; アドレナリン受容体; TRPC6チャネル; ROCC

私たちは、受容体作動性Ca^<2+>流入機構の一つとして、受容体およびチャネルと相互作用するSnapin分子が、受容体の活性化を受けて二量体を形成することにより"受容体-Snapin-チャネル"複合体を形成し、受容体が活性化されたというシグナルをチャネルへ伝達するメカニズムを考えている。そして、Snapinが複数の受容体やチャネルと相互作用することにより、このCa^<2+>流入機構が汎用性を持つと考えている。本年度はこのような仮説に基づいて検討し、以下のような結果を得た。1.α_<1A>受容体の活性化を受けて、細胞内に存在しているTRPC6チャネルが細胞膜表面に移行することがCa^<2+>流入増大の直接的なメカニズムであることを、brefeldin A(タンパク輸送阻害剤)を用いて検討した。brefeldin Aで処置した細胞では、α_<1A>アドレナリン受容体の活性化により引き起こされるTRPC6チャネルを介するCa^<2+>流入が著しく抑制されたことから、α_<1A>受容体作動性Ca^<2+>流入の増大機構においてTRPC6チャネルの細胞内から細胞膜への移行が必須であることを明らかにした。2.Snapinの二量体化についてBiFC(Bimolecular fluorescence complementation)法を用いて検討した。その結果、Snapinは細胞膜近傍に局在していること、そのN末端を結合して二量体を形成すること、さらに受容体の活性化により二量体形成が増加することを明らかにした。3.α_<1A>サブタイプ以外のアドレナリン受容体がSnapinと相互作用する可能性について、イースト2ハイブリッド法を用いて検討した。その結果、α_<1B>,α_<1D>,β_1アドレナリン受容体サブタイプについては陽性の、また、α_<2A>,α_<2B>,α_<2C>,β_2,β_3については陰性の反応が得られたことから、Snapinが複数の受容体と相互作用する可能性が示唆された。

我们考虑了一种机制，通过这种机制，与受体激活时与受体和通道相互作用的Snapin分子形成了二聚体，形成“受体 - 秒通道通道”复合物，并传递信号，表明受体已激活了该通道。此外，我们认为由于Snapin与多个受体和通道的相互作用，这种Ca^<2+>涌入机制具有多种用途。今年，我们根据这些假设检查了以下结果。 1。BrefeldinA（蛋白质转运抑制剂）用于研究激活α__<1A>受体后CA^<2+>涌入涌入的直接机制，细胞内TRPC6通道迁移到细胞膜表面。 In cells treated with brefeldin A, Ca^<2+> influx via the TRPC6 channel induced by activation of the α_<1A>adrenergic receptor was significantly suppressed, and thus it was revealed that the intracellular and cell membrane translocation of the TRPC6 channel to the cell membrane is essential in the mechanism of increasing α_<1A> receptor agonist Ca^<2+> influx. 2。使用BIFC（双分子荧光完成）方法研究了Snapin的二聚化。结果，揭示了Snapin位于细胞膜附近，它结合其N末端形成二聚体，并且受体的激活增加了二聚体的形成。 3。使用酵母2杂交方法研究了与Snapin相互作用的α__<1A>亚型以外的肾上腺素受体的可能性。结果显示α_<1b>，α_<1d>，β_1肾上腺素能受体亚型和α__<2a>，α_<2b>，α__<2c>，β_2，β_3的阳性反应，表明Snapin可能与多受受体相互作用。