ミカズキモの有性的細胞分裂を誘起する活性物質の特性解析

Mikazukimo 诱导性细胞分裂的活性物质的表征

• 批准号: 09740608
• 负责人: 関本 弘之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09740608/
• 关键词: ミカヅキモ; 有性生殖; 性フェロモン; 性分化; 有性的細胞分裂

本年度は有性的細胞分裂を誘起する物質について遺伝子の単離を行った。昨年度の決定した本物質のアミノ酸配列をもとにして、対応するオリゴヌクレオチドを合成した。一方、接合を行わせたミカヅキモ細胞よりRNAを単離し、常法に基づきcDNAを合成した。これらを用いて、RACE-PCR法により本物質をコードする全長のcDNAを単離することに成功した。得られた全長cDNAは906bpの長さであり、630bpのタンパク質推定コード領域を含んでいた。推定タンパク質のN末端には26アミノ酸で構成されるシグナル配列と思われる疎水性の高い領域が存在し、それに続いて、精製標品のN末端と一致する配列までに33アミノ酸の機能未知の中間配列が存在していた。培地中に分泌されるポリペプチド部分は150アミノ酸で構成される16,723Daの分子であり、アスパラギン結合型糖鎖の付加シグナルも見出された。得られたDNA配列およびアミノ酸配列を元に、データベース上で相同性検索を行ったが、既知の遺伝子、タンパク質との有意な相同性は見られなかった。しかしながら、別種のミカヅキモC.pslcから単離された性フェロモン(PR-IP Inducer)との間にアミノ酸レベルで49.4%の高い相同性が見られた。

今年，将基因分离为诱导性细胞分裂的物质。根据去年确定的该物质的氨基酸序列合成相应的寡核苷酸。同时，将RNA从共轭的mikazukimo细胞中分离出来，并根据常规方法合成cDNA。使用这些方法，通过Race-PCR方法成功隔离了编码该物质的全长cDNA。所得的全长cDNA长906 bp，并包含一个630 bp预测的蛋白质编码区。在假定蛋白的N末端，有一个高度疏水区域，被认为是由26个氨基酸组成的信号序列，其次是33个氨基酸的未知中间序列，与纯化制剂的N-末端相吻合。培养基中分泌的多肽部分是由150个氨基酸组成的16,723Da分子，还发现了天冬酰胺连接的聚糖的添加信号。基于获得的DNA和氨基酸序列在数据库上进行同源搜索，但没有发现与已知基因或蛋白质的显着同源性。然而，在氨基酸水平上发现了高度同源性为49.4％，其性信息素（PR-IP诱导剂）从另一种Mikazukimo c.pslc分离出来。

项目成果

R.Fukumoto: "A newly identified chemotactic sexual pheromone from Closterium ehrenbergii" Sexual Plant Reproduction. 11. 81-85 (1998)

R.Fukumoto：“一种新鉴定的来自埃伦伯格新月藻的趋化性信息素”有性植物繁殖。

R.Fukumoto: "Detection and evaluation of a novel sexual pheromone that induces sexual cell division of Closterium ehrenbergii(Chlorophyta)" Journal of Phycology. 33. 441-445 (1997)

R.Fukumoto：“诱导新月藻有性细胞分裂的新型性信息素的检测和评估”藻类学杂志。

R.Fukumoto: "A newly identified chemotactic sexual pheromone from Closterium ehrenbergii" Sexual Plant Reproduction. (印刷中). (1998)

R.Fukumoto：“新发现的来自新月藻的趋化性信息素”有性植物繁殖（1998 年）。

H.Sekimoto: "Molecular cloning of a novel sex pheromone responsible for the release of a different sex pheromone in Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex" Plant and Cell Physiology. 39(11). 1169-1175 (1998)

H.Sekimoto：“一种新型性信息素的分子克隆，负责在新月藻-strigosum-littorale复合体中释放不同的性信息素”植物和细胞生理学。

B.Endo: "Analysis of genomic sequences encoding a sex pheromone from the Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex" Journal of Plant Research. 110. 463-467 (1997)

B.Endo：“编码新月藻-strigosum-littorale 复合体性信息素的基因组序列分析”植物研究杂志。