腫瘍細胞選択的アポトーシスによる内分泌系悪性腫瘍の遺伝子治療の開発

利用肿瘤细胞选择性凋亡开发内分泌系统恶性肿瘤基因治疗

• 批准号: 08770808
• 负责人: 川上 康
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770808/
• 关键词: 甲状腺癌; アポトーシス; 遺伝子治療

内分泌系腫瘍は産生ホルモンが臓器特異的であるため、アポトーシス誘導遺伝子を特異的ホルモンのプロモーターとともに導入すれば、臓器特異的な遺伝子発現をおこなうことが可能である。臓器特異的なプロモーターとして、サイログロブリン遺伝子プロモーター領域を用いて、アデノウイルスベクターを用いて導入した際に、臓器特異性が維持されるかを検討した。その結果、従来報告されていた範囲のプロモーター領域では非甲状腺細胞においてもプロモーター活性が生じてしまうことがルシフェラーゼ解析により判明した。そこでサイログロブリン遺伝子上流領域を広くクローニングして解析した結果、従来報告された部分よりさらに上流に臓器特異性をさらに厳密に決定する調節領域が存在することを発見した。培養系においてヒト甲状腺癌細胞、ヒト甲状腺正常細胞、対照としてヒト肝細胞株(Hep G2)、ヒト線維芽細胞株に上記プロモーターとともにアデノウイルスベクターによりマウスFAS遺伝子を導入した結果、甲状腺細胞にFASが選択的に発現し、抗FAS抗体添加により選択的にアポトーシスへと誘導できた。ヒト甲状腺手術検体におけるサイログロブリンプロモーター活性はサイクログロブリン濃度が検出感度以下のものでも存在した。これらの腫瘍から樹立した初代培養細胞をヌードマウスに移植し、FAS遺伝子導入後、抗FAS抗体を投与した結果、腫瘍選択的にアポトーシスを惹起しえた。以上の結果はFAS遺伝子導入による甲状腺癌モデル動物の遺伝子治療が可能であることを示した。今後、安全性の問題が確認されればホルモン産生臓器由来の悪性腫瘍の遺伝子治療法として臨床応用が可能であると考えられる。

由于内分泌肿瘤中的生产激素是器官特异性的，因此可以通过用特定激素的启动子引入凋亡诱导基因来进行器官特异性基因表达。我们调查了使用甲状腺球蛋白基因启动子区域作为器官特异性启动子使用腺病毒载体引入器官特异性。结果，荧光素酶分析表明，即使在先前报道的范围内的启动子区域的非甲状腺细胞中，启动子活性也会发生。因此，我们发现更精确地决定器官特异性的调节区域甚至在甲状腺球蛋白基因的上游也存在。 In the culture system, the mouse FAS gene was introduced into human thyroid cancer cells, normal human thyroid cells, human hepatocellular cell lines (Hep G2) as a control, and human fibroblast cell lines with the above promoter, and as a result, FAS was selectively expressed in thyroid cells, and the addition of anti-FAS antibodies allowed selective inducing apoptosis.在环球蛋白浓度低于检测敏感性的情况下，在人甲状腺外科手术标本中的甲状腺球蛋白启动子活性也存在。从这些肿瘤中确定的原代培养细胞被移植到裸鼠中，在转移FAS基因后，给予抗FAS抗体，导致肿瘤选择性凋亡。上述结果表明，通过FAS基因转移是甲状腺癌模型动物中的基因治疗是可能的。如果将来确认了安全问题，则认为可以将临床应用作为一种基因治疗方法，用于衍生出产生激素器官的恶性肿瘤。

项目成果

Y.Kawakami: "VEGF is upiegulatd by high glucose concentration and acute depriration in pigmented cell in the retircl tissue" Biochem Biophys.Res.Comm.287. 741-746 (1996)

Y.Kawakami：“VEGF 因高葡萄糖浓度和视网膜组织中色素细胞的急性缺失而升高”Biochem Biophys.Res.Comm.287。

Y.Kawakami: "Intracellular Fatty Acid Down-Regulatc ob(obese)gere expression in 3T3-L1 adipocytes" J.Biol:chem. 272. 456-463 (1997)

Y.Kawakami：“3T3-L1 脂肪细胞中细胞内脂肪酸下调表达”J.Biol：chem。