アシアロ糖蛋白の肝細胞内での代謝機構

肝细胞脱唾液酸糖蛋白的代谢机制

基本信息

批准号：
08770417
负责人：
原田大
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770417/
关键词：
アシアロ糖蛋白エンドサイトーシス肝細胞ライソゾーム

项目摘要

肝細胞でのアシアロ糖蛋白のレセプターを介した取り込みと細胞内輸送において細胞内のエンドゾームやライソゾームのpH(vacuolar PH,endosomal pH)が、いかなる役割をはたしているかをvacuoar H^+ATPaseの特異的阻害剤であるbafilomycin Alを用いて検討した。蛍光顕微鏡を用いた観察では、bafilomycin Alによりacridine orangeの蓄積するpHの低いエンドゾームが消失し、endosomal pHの維持にvacuolar H^+ATPaseが必要であることが証明された。金コロイドでラベルしたアシアロ糖蛋白と電子顕微鏡を用いたaffinity cytochemistryでの観察では、レセプターを介したアシアロ糖蛋白の取り込みはbafilomycin Alにより阻害されたが、fluid-phase endocytosisされるhorseradish peroxidase(HRP)の取り込みには影響を与えず、bafilomycin Alはレセプターのリサイクリングを阻害することによりアシアロ糖蛋白のレセプターの数を減少させることによりアシアロ糖蛋白の取り込みを阻害すると考えられた。また、電子顕微鏡とimage analyzerを用いた画像解析では、bafilomycin Alにより細胞辺縁部での、つまりearly endosomeの膜癒合が阻害され、early endosome間のmembrane fusionにvacuolar pHが重要な役割を演じていると考えられた。以上よりvacuolar pHはアシアロ糖蛋白のレセプターのリサイクリングとearly endosome間のmembrane fusionに重要な役割を演じていると考えられた。また、肝類洞内皮細胞のマンノースレセプターを介したendocytosisにおいてもマンノースを末端に持つ糖蛋白であるHRPを用いた検討を行い、類洞内皮細胞でのマンノースレセプターのリサイクリングにもvacuolar pHが重要な役割を演じていることが証明された。

使用Bafilymycin Al研究了细胞内内体和溶酶体pH（液泡pH，内体pH）在受体介导的肝细胞中摄取和细胞内转运中的作用，bafilomycin al是一种特定的真空H^+ATPase的抑制剂。使用荧光显微镜进行观察表明，巴菲霉素Al消除了脆皮橙的累积内体，并且需要真空h^+ATPase来维持内体pH。 Observation with colloidal gold labeled asialoglycoprotein and electron microscopy using affinity cytochemistry showed that receptor-mediated uptake of asialoglycoprotein was inhibited by bafilomycin Al, but it did not affect uptake of horseradish peroxidase (HRP), which is fluid-phase endocytosis, and bafilomycin Al inhibits uptake of通过抑制受体回收并减少亚乳糖蛋白的受体数量来通过抑制受体回收。此外，在使用电子显微镜和图像分析仪的图像分析中，巴菲霉素Al抑制细胞边缘的膜融合，即早期内体和真空pH pH在早期内粒之间的膜融合中起重要作用。从上面可以看出，液泡pH在早期内体之间的亚乳糖蛋白和膜融合的受体的回收中起着重要作用。此外，在通过肝弦正弦内皮细胞中的甘露糖体受体的内吞作用中，我们使用HRP（最终携带甘露糖的糖蛋白携带的糖蛋白）进行了研究，事实证明，液泡pH在正弦内膜内皮细胞中的结糖受体循环中起重要作用。