C型肝炎ウイルス持続感染マウスの作製と発がん機構の解明

丙型肝炎病毒持续感染小鼠的产生及其致癌机制的阐明

基本信息

批准号：
20012023
负责人：
三浦直行
金额：
$ 6.78万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Alb-uPA免疫不全マウスは常時10匹を維持している。このマウスの雌雄を交配すると4分の1にAlb-uPAをホモにもつ子マウスができる。生後3週のホモマウスにDsRed2遺伝子で肝細胞を赤くマークしたマウス肝臓から初代肝細胞を調製し、Alb-uPAホモマウス脾臓に5×10^5個の肝細胞を移植した。4週後に肝臓を観察したところ、約半分が赤色にマークされた肝細胞に置換されていた。この結果に基づき、ヒト肝細胞を5×105^個ホモマウス脾臓に移植したところ、4週後にヒト肝細胞がかなりの領域を占めていることが確認できた。前年度に、ヒトSR-BI(scavenger receptor class B type I),CD81, claudin-1を肝細胞特異的に発現するトランスジェニックマウスを作製した(6系統)。肝細胞抽出液を用いたウエスタンブロット法により、ヒトSR-BI, CD81, claudin-1の3蛋白が発現をしているマウスが2系統いることが判明した。今年度は、C型肝炎ウイルス(HCV)の感染にはoccludin蛋白も重要であるという報告(Nature 457:882-886,2009)に基づき、ヒトoccludin蛋白を肝細胞特異的に発現しているトランスジェニックマウスを作製した。5系統中2系統にヒトoccludin蛋白の発現を認めた。そこで、ヒトCD81, SR-BI, claudin-1発現マウスとヒトoccludin発現マウスを交配し、4つのヒト蛋白を発現しているマウスを得た。このマウス肝臓切片に大腸菌で産生したHCVのE2蛋白の結合を確認した。野生型肝臓切片では、E2蛋白は結合しないが、4つのヒト蛋白を発現したマウス肝臓切片へはE2蛋白が結合した。現在、患者血清中のHCVをこの4蛋白発現マウスに注射し、感染がおこるかどうかの判定を行なおうとしている。

总是有10只ABLA免疫缺陷小鼠。当这些小鼠交配时，四分之一的小鼠会产生alb-upA同源小鼠。从带有DSRED2基因的小鼠肝脏中制备原发性肝细胞，并将5×10^5的肝细胞植入Alb-upa Homo小鼠的脾脏中。 4周后，观察到肝脏，大约一半被红标记的肝细胞代替。基于这些结果，将人肝细胞移植到5×10 5^ Homo小鼠的脾脏中，并且已经证实人肝细胞在4周后占据了相当大的面积。在上一年，制备了专门表达人类SR-BI（清道夫受体I类），CD81和Claudin-1的转基因小鼠（6株）。使用肝细胞提取物的蛋白质印迹显示，有两只表达三种蛋白质的小鼠：人类SR-BI，CD81和Claudin-1。今年，我们根据报告说，基于闭塞蛋白蛋白对于丙型肝炎病毒（HCV）的感染也很重要（自然：457：882-886，2009），我们制备了特异性表达人类闭合蛋白的转基因小鼠。在五个菌株中，有两种观察到人已闭合蛋白的表达。因此，表达人CD81，SR-BI和Claudin-1的人与表达occludin的人交叉，并获得了表达四种人蛋白的小鼠。在此小鼠肝脏中证实了在大肠杆菌中产生的HCV E2蛋白的结合。在野生型肝脏切片中，E2蛋白不与表达四种人蛋白的小鼠肝脏截面结合，而是与小鼠肝切片结合的E2蛋白。当前，将患者血清中的HCV注入表达4蛋白的小鼠中，以确定是否发生感染。