肝細胞癌におけるネスチン（幹細胞マーカー）の機能解析とバイオマーカーとしての評価

肝细胞癌中巢蛋白（干细胞标记物）的功能分析及其作为生物标记物的评价

基本信息

批准号：
26930022
负责人：
林芳弘
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26930022/
关键词：
肝癌細胞ネスチンバイオマーカー

项目摘要

【研究目的】申請者は、神経幹細胞および各組織のstem/progenitor cellsのマーカーである中間係フィラメント ; ネスチンタンパクを肝細胞癌症例のホルマリン固定パラフィンブロックとtissue microarrayを、抗ネスチン抗体を用いて免疫組織化学的に解析した結果、予後の非常に悪い症例と肝癌転移巣に高頻度に発現していることを見出した。この観察から、ネスチンは、ヒト肝癌細胞の遊走・転移・細胞増殖能に関連していると考え、肝細胞癌の予後を推察する新たなバイオマーカーになるのではないかと推測した。本研究では、ヒト肝癌細胞の遊走・転移・細胞増殖能に与えるネスチンタンパクの機能解析とそのメカニズムを追究するとともに、肝細胞癌の針生検と手術材料(パラフィン切片)を用いてネスチン遺伝子・タンパク発現とその予後について病理学的に考察し、予後推察の新たなバイオマーカー開発を最終目的とした。【研究結果】ヒト肝細胞癌細胞株のネスチン過剰発現株(HLF)、ノックダウン株(Huh-7)を樹立し、コントロール群と形態的に比較すると、過剰発現株では、変化は認められなかったが、ノックダウン株では紡錘形を呈した。また、細胞遊走能・浸潤能は過剰発現群では亢進し、ノックダウン群では低下することからネスチンは、細胞遊走能・浸潤能に関与していることが示唆された。一方、in vivo 研究として、Huh-7(ネスチンノックダウン肝細胞癌細胞)をヌードマウスに皮下移植し、コントロール群と腫瘍形成能、転移動態を比較したが、統計学的解析では有意な差は認められなかった。病理標本の組織化学的にネスチン発現についての検討では、肝癌細胞の肝生検症例は非常に稀であり、パラフィン切片からmRNAの抽出を試みたが困難であったが、手術摘出肝細胞癌症例を用いたネスチン発現と予後に加え、遊走・浸潤に関与し予後予測バイオマーカーであると以前報告したファシン発現とは強い相関が認められた。【考察】神経幹細胞のマーカーであるネスチンは、肝癌予後を推察する新たなバイオマーカーとなることが示唆された。

[研究目的]申请人免疫组织化学分析了每个组织中神经干细胞和干细胞/祖细胞的福尔马蛋白固定的石蜡块和组织微阵列，使用抗Nestin抗体来免疫组化抗体对福尔马林进行了福尔马蛋白蛋白的较差的福音蛋白折叠术和组织较高的病例，并在高度的病例中发现了海皮蛋白脑的表现障碍，并以此为例。和肝癌转移。从这一观察结果中，我们怀疑Nestin与人肝癌细胞迁移，转移和细胞增殖的能力有关，并且它可能成为推断肝细胞癌预后的新生物标志物。这项研究研究了巢蛋白蛋白在人肝癌细胞的迁移，转移和细胞增殖及其机制上的功能分析，还检查了使用针头活检和外科手术材料（食性磷脂术）的内丁基因和蛋白质表达及其预后，以开发新的AIMAMARKARMARKARMARKARMARKARMARMARKARMARKARMARKARMARMARMARKERSARMARKARMARKERSARMARMARKERSARMARKERSARMARMARKARMARKERSARS。 [研究结果]建立了人肝细胞癌细胞系的Nestin过表达菌株（HLF）和敲低菌株（HUH-7），并且在形态学上与对照组进行比较时，在过度表达的菌株中没有观察到变化，但是敲低菌株表现出刺激性的形状。此外，过表达组的细胞迁移和侵入性潜力增加，并在敲低组中减少，这表明Nestin参与细胞迁移和侵入性潜力。另一方面，在体内研究中，将HuH-7（Nestin敲低肝细胞癌细胞）皮下植入裸鼠中，并将肿瘤性和易位与对照组进行比较，但在统计分析中没有观察到显着差异。在组织化学检测巢蛋白在病理标本中的表达中，肝癌细胞的肝活检病例极为罕见，很难从石蜡切片中提取mRNA，但发现与Fascin的表达存在很强的相关性，以前据报道，该氏蛋白在巢穴中的预测性生物标志物在赫普尔氏菌中均具有良好的carcational carcaTocalliolar carciinsor，均与甲壳虫的预测性相关性，该表达涉及，这是在脑中的预测性生物标志物。入侵。 [讨论] Nestin是神经干细胞的标志物，被认为是推断肝癌预后的新生物标志物。