がん樹状細胞ワクチン療法における免疫モニタリング法の確立と臨床への応用

癌症树突状细胞疫苗治疗免疫监测方法的建立及临床应用

• 批准号: 23931034
• 负责人: 樋口 由美子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931034/
• 关键词: 樹状細胞療法; MLPC法; テトラマー解析

1)MLPC(Mixed Lymphocyte-PeptideCulture)法の条件の確立(1)健常人末梢血単核球(PBMC)にサイトメガロウイルス(CMV)ペプチドを添加し10%ウシ血清アルブミン(BSA)またはヒトAB血清(HSAB)添加培地で2週間培養した後、テトラマー解析にてCMV特異的CTLを測定した。BSA添加培地では細胞障害性T細胞(CTL)未検出であったが、HSAB添加培地では高頻度に検出された。ゆえに添加血清はHSABが適当と思われた。(2)96wellプレート1wellあたり1×10^5、2×10^5の細胞数にてMLPCを行い、2週間後にテトラマー解析を行った。1×10^5では28well中7wellでCTLを確認したのに対し、2×10^5では14well中全てのwellでCTLを確認した。また、2×10^5では1×10^5に比較して、1wellのテトラマー陽性率が高かった。このことから、2×10^5の播種ではCTLが1well中2個以上存在する可能性が考えられた。ゆえに、より正確にCTLを測定するためには、1wellあたり1×10^5が適当と思われた。(3)5、10、20μMの3濃度の抗原ペプチドを添加してそれぞれMLPCを行った。培養2週間後にテトラマー解析にてCTLを測定した。その結果誘導出来たCD8陽性T細胞中のCTL数は、それぞれ8.4×10^<-6>、10.5×10^<-6>、4.2×10^<-6>であり、10μMが最も誘導率が高かった。2)臨床への応用現行法ではCTLが検出されない患者PBMCを用いて、MLPC後にTetramer解析を行った。ワクチン投与前ではCTLが確認できなかったが、投与7回ではCD8陽性T細胞中6.8×10^<-6>、投与15回では12.3×10^<-6>とCTLが増加していた。MLPC法により、患者末梢血中のCTLの検出率を上げることが可能となった。

1）将MLPC（混合淋巴细胞肽培养）的疾病（1）胞瘤病毒（CMV）肽添加到健康的人类外周血单核细胞（PBMC）中，并在培养基中培养10％的牛血清白蛋白（BSA）或人类abm sabm and abm abm sabm and sabm sabm and sab and sab sab（hsab）（hsab）（hsab）（使用四聚体分析。在BSA添加的培养基中未检测到细胞毒性T细胞（CTL），但在HSAB添加的培养基中，它以高频检测到。因此，HSAB被认为适合添加的血清。 （2）每孔板的多个细胞和2×10^5的细胞进行MLPC，两周后进行四聚体分析。在1×10^5的28口井中有7口确认了CTL，而在2×10^5的所有14口井中确认CTL。此外，与1×10^5相比，2×10^5在1孔中显示出更高的四聚体速率。这表明在2×10^5播种时，一个孔中可能有两个以上的CTL。因此，每井1×10^5似乎适合更准确地测量CTL。 （3）MLPC是通过添加三个浓度的5、10和20μM的抗原肽进行的。培养后两周通过四聚体分析测量CTL。诱导的CD8阳性T细胞中的CTL计数分别为8.4×10^<-6>，10.5×10^<-6>和4.2×10^<-6>，其诱导率最高，为10μM。 2）使用PBMC在当前方法中未检测到CTL后进行临床施用四聚体分析。尽管在疫苗给药前未确认CTL，但CTL在7剂CD8阳性T细胞中增加，而在15剂施用中，CTL增加了12.3 x 10^<-6>，在CTL中增加了CTL。 MLPC方法已使患者外周血中CTL的检测率增加。