樹状細胞における人工がん抗原WT1ペプチドと樹状細胞の効率的な反応条件の確立

树突状细胞中人工癌抗原WT1肽与树突状细胞高效反应条件的建立

基本信息

批准号：
24931031
负责人：
樋口由美子
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24931031/
关键词：
樹状細胞 WT1ペプチド WT1特異的リンパ球

项目摘要

実験内容と結果1)WT1ペプチドと樹状細胞(DC)の効率的な反応条件の検討FITCで蛍光標識したWT1ペプチドをDCに4℃、室温、37℃の温度条件下で、5分、10分、15分、30分、1時間パルスし、WT1結合DCをフローサイトメーターにより測定した。その結果、4℃では30分(30.0%)1時間(34.6%)。室温では30分(83.2%)1時間(97.2%)。37℃では5分(54.9%)10分(89.3%)、15分(98.2%)であった。以上より、37℃10分で最も短時間で高率にWT1結合DCを作製できた。反応温度、反応時間による生細胞率の低下も認められなかった。2)WT1特異的リンパ球の誘導次に37℃10分でWT1ペプチドをパルスしたDCとリンパ球を共培養し、2週間後にフローサイトメーターを用いてテトラマー解析を行い、WT1特異的リンパ球を検出した。同様に(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)及び(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)もそれぞれ共培養し、37℃10分パルスDCにおけるWT1特異的リンパ球の誘導率と比較した。その結果、(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)>(37℃10分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)>(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)の順に高頻度にWT1特異的リンパ球が誘導された(6:4:1)。3)細胞障害活性の測定誘導できたWT1特異的リンパ球の絶対数が少なかっため、細胞障害活性を測定することはできなかった。今後、より多くのWT1特異的リンパ球を誘導できる条件の検討が必要である。結論DCとWT1ペプチドの効率的な反応条件は37℃10分であった。WT1ペプチドパルスDCが、WT1特異的リンパ球を誘導することが確認でき、しかもWT1ペプチド結合DCが多いほど誘導率は高かった。

实验含量和结果1）检查WT1肽和树突状细胞（DC）之间有效的反应条件的荧光WT1肽在FITC中的荧光符号为4°C，室温，37°C，脉搏为脉冲，15分钟，30分钟30分钟1小时，用流场表测量WT1结合DC。结果，在4°C下为30分钟（30.0％）1小时（34.6％）。在室温下30分钟（83.2％）1小时（97.2％）。在37°C时，为5分钟（54.9％）10分钟（89.3％），15分钟（98.2％）。从上面，可以在37°C的最短时间生产WT1结合DC 10分钟。由于反应温度或反应时间，活细胞没有降低。 2）WT1特异性淋巴细胞的引导下一步，CO培养DC和WT1肽在37°C下进行WT1肽，并在2周后使用流场表进行四次分析，并使用WT1的特定淋巴细胞。类似地，（4°C 30分钟WT1肽脉冲DC+淋巴细胞）和（WT1肽10μM+DC+DC+淋巴细胞）也被培养，与WT1特异性淋巴细胞诱导率相比，在37°C 10分钟脉冲DC时进行培养。结果，（WT1肽10μM+DC+淋巴细胞）>（37°C 10分钟10分钟10分10分WT1肽脉冲DC+淋巴细胞）>（4°C 30分钟WT1 WT1 WT1 WT1肽脉冲DC+淋巴细胞）指导。 3）测量细胞障碍活性，无法测量细胞障碍活性，因为可以指导和诱导的WT1特异性淋巴细胞的绝对数量。将来，有必要检查可以指导更多WT1特异性淋巴细胞的条件。结论DC和WT1肽之间的有效反应条件为37°C。10分钟。 WT1肽脉冲直流可以确认WT1特异性淋巴细胞被引导，WT1肽DC越高，诱导率越高。