QProbe法を用いた薬剤耐性菌の迅速検出

QProbe法快速检测耐药菌

基本信息

批准号：
17H00635
负责人：
坂井優喜子
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00635/
关键词：
薬剤耐性菌 ESBL MRSA

项目摘要

1. 研究目的微生物検査では、質量分析装置の導入により菌種の迅速な同定が可能となった。しかし、薬剤感受性試験には時間を要するのが現状である。全自動遺伝子解析装置GENE CUBE(東洋紡)は簡便・迅速(約1時間)に目的遺伝子を検出する。PCRで目的遺伝子の標的領域を増幅後、蛍光標識プローブであるQProbeを使用した融解曲線解析にて遺伝子の検出を行う。そこで本研究では、GENE CUBEを用いて血液培養陽性ボトルおよび菌株より迅速に耐性菌を検出することを目的とした。2. 研究方法と成果(1) 血液培養陽性ボトルからのMRSA検出MRSAが検出された血液培養ボトル24件を対象とした。ボトル内容物を材料としてGENE CUBEにてMRSAの検出を行った。対象24件はGENE CUBEにてMRSA 8件、MSSA 9件、MR-CNS 5件、MS-CNS 2件となり、従来法の結果と一致した。さらに詳細に検討するため菌株数を増やして検討中である。(2) 菌株からのESBL遺伝子検出当院にて保管されていたESBL陽性30株、陰性7株を対象とした。クラブラン酸(CVA)、PCR、GENE CUBEを用いてESBL遺伝子の検出を行った。PCRとGENE CUBEではESBLの型別を行った。GENE CUBEを用いたESBL遺伝子の検出は陽性30株、陰性7株で、PCR、CVAを用いた方法と一致した。GENE CUBEによるESBLの型別はPCRの結果と一致し、同時に保有する耐性遺伝子に影響されなかった。以上より、GENE CUBEは良好・迅速にESBLを検出することが示された。早期の感染症治療および感染対策において有用と考えられた。MRSAに関しては株数を増やして検討中である。

1. 在用于研究目的的微生物检测中，质谱分析法的引入使得快速鉴定细菌种类成为可能。但目前的情况是药敏检测需要时间。全自动基因分析仪GENE CUBE（东洋纺）可轻松快速（约1小时）检测目标基因。通过 PCR 扩增目的基因的目标区域后，使用荧光标记探针 QProbe 通过熔解曲线分析来检测该基因。因此，在本研究中，我们的目标是使用 GENE CUBE 快速检测血培养阳性瓶和菌株中的耐药细菌。 2.研究方法及结果（1）血培养阳性瓶中MRSA的检测以24个检出MRSA的血培养瓶为对象。使用 GENE CUBE 使用瓶中内容物检测 MRSA。 GENE CUBE的24例中，有8例MRSA、9例MSSA、5例MR-CNS、2例MS-CNS，与常规方法的结果一致。我们目前正在增加细菌菌株的数量以进行更详细的研究。 (2)菌株ESBL基因检测我们针对我院保藏的30株ESBL阳性菌株和7株ESBL阴性菌株进行了检测。使用克拉维酸(CVA)、PCR和GENE CUBE检测ESBL基因。使用 PCR 和 GENE CUBE 对 ESBL 进行分型。 GENE CUBE检测ESBL基因，阳性菌株30株，阴性菌株7株，与PCR、CVA检测结果一致。 GENE CUBE的ESBL分型与PCR结果一致，且不受同时携带的耐药基因的影响。由此可见，GENE CUBE可以很好、快速地检测ESBL。它被认为有助于早期传染病治疗和感染控制。关于MRSA，我们正在考虑增加库存数量。