細胞毒性ステロイドアルカロイドRitterazine Bの作用機序に関する研究

细胞毒类固醇生物碱利特嗪B的作用机制研究

• 批准号: 12780445
• 负责人: 福沢 世傑
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780445/
• 关键词: リッテラジン; ホヤ; リポソーム; 標的タンパク質; アフィニティーカラム; タンパク精製

Ritterazine Bはその分子の形が細長く長さが約30オングストロームと細胞膜に相当する長さなので、ま細胞膜に何らかの作用をするかどうかを調べるために蛍光剤を封入したリポソームを調製し、Ritterazine Bの濃度をふって蛍光剤の流出実験を行った。この結果、細胞毒性の1万倍の濃度でコレステロールに依存しない膜透過性増大作用活性を示したが、溶血活性を示さないことからRitterazine Bは膜透過性増大作用が活性の主たる作用機序ではなく、ある特定のタンパク質に相互作用し、その機能を阻害することにより、活性を示すものと結論した。このため標的タンパク質を同定するためにトリチウム標識体を合成し、アイソトープトレーサー法によりウシ脳より、標的分子の探索を進めた結果、ウシ脳のシナプトソームの膜画分に特異的結合を見出した。更に陰イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過を行った結果SDS PAGE上で分子量約50kDa付近に蛋白質のバンドを確認した。以上の結果を総合するとRitterazine Bはその強力な細胞毒性の作用機序は分子量50kDaを中心とするその前後付近に存在する膜蛋白質であるとの知見を得た。

利特嗪B具有细长的分子，长度约为30埃，相当于细胞膜。为了研究利特嗪B是否对细胞膜有影响，我们制备了封装有荧光剂的脂质体，并进行了荧光剂流出实验。以不同浓度进行。结果，利特嗪B在细胞毒性浓度10,000倍的浓度下表现出不依赖于胆固醇的膜通透性增加活性，但不表现出溶血活性，表明膜通透性增加活性是利特嗪B的主要作用机制。该活性是通过与特定蛋白质相互作用并抑制其功能来显示的。因此，为了鉴定目标蛋白，我们合成了氚标记的化合物，并利用同位素示踪方法从牛脑中寻找目标分子，结果发现与牛脑膜部分有特异性结合。脑突触体。另外，通过阴离子交换层析和凝胶过滤，在SDS PAGE上确认到分子量约50kDa的蛋白质条带。结合以上结果，我们发现利特嗪B强细胞毒性的作用机制是一种分子量在50 kDa左右存在的膜蛋白。